常用菌種保藏方法(常用的菌種保存方法)
1.常用的菌種保存方法有哪些
菌種保藏是食用菌產(chǎn)業(yè)的一項(xiàng)基礎(chǔ)工作，是確保野生種質(zhì)資源基因留存和現(xiàn)有生產(chǎn)用種遺傳性能相對(duì)穩(wěn)定的必要手段。
菌種保藏的方法多種多樣，有的雖然保藏效果好，但投資高或操作繁雜。在生產(chǎn)實(shí)踐中，更需要設(shè)備投入少，能保障菌種不死亡、不污染、最大限度地保持優(yōu)良種性的簡(jiǎn)便方法，如斜面低溫短期保藏和自然基質(zhì)較長(zhǎng)期保藏相結(jié)合的方法。
一般而言，對(duì)母種進(jìn)行長(zhǎng)期保存，對(duì)原種進(jìn)行短期保存。須保證優(yōu)良菌種的性狀和活力不發(fā)生變異，不死亡，不被污染，確保其純度。
因此，保存方法應(yīng)具備取材容易、操作方便、菌種不易退化、長(zhǎng)期保存不污染雜菌等優(yōu)點(diǎn)。常用的菌種保存方法如下：（一）斜面低溫保藏 該法的優(yōu)點(diǎn)是保藏方便且所占空間較小。
具體做法是：菌絲長(zhǎng)滿斜面后，放在0~5℃保存。以后每隔一定時(shí)間（2~3個(gè)月）轉(zhuǎn)管一次。
轉(zhuǎn)管保存不能長(zhǎng)期用PDA培養(yǎng)基，否則種性易退化，灰樹(shù)花降解木質(zhì)纖維素的能力減弱。因此隔一定時(shí)間（1年左右）須把菌種轉(zhuǎn)接到木屑培養(yǎng)基上復(fù)壯，之后挑選健壯無(wú)污染的菌絲再轉(zhuǎn)回PDA培養(yǎng)基保存。
在長(zhǎng)期保存過(guò)程中，要防棉塞受潮滋生雜菌。菌種試管口最好用蠟燙封，以防培養(yǎng)基內(nèi)水分過(guò)快蒸發(fā)。
增加瓊脂用量（2.5%~3%）可減緩水分蒸發(fā)。還要防止菌種管上的標(biāo)簽脫落而造成種系混雜。
斜面低溫保藏方法簡(jiǎn)便易行，能隨時(shí)觀察保藏菌株的活力和純度，一旦染雜，肉眼能及時(shí)發(fā)現(xiàn)。（二）自然基質(zhì)保藏 此法是根據(jù)灰樹(shù)花的特性，利用自然基質(zhì)保藏其菌種的方法。
灰樹(shù)花是木腐菌，可以采用以木屑為主料的培養(yǎng)基。自然基質(zhì)營(yíng)養(yǎng)全面，且大部為緩釋養(yǎng)分，不易產(chǎn)生營(yíng)養(yǎng)過(guò)?；蝠囸I；其次，培養(yǎng)基理化性狀好，可吸收或緩沖菌絲代謝出的有害物質(zhì)，水分與通氣協(xié)調(diào)平衡，部分菌絲扎入基質(zhì)內(nèi)生長(zhǎng)，不裸露于空氣中，菌絲呼吸強(qiáng)度低，生命力強(qiáng)。
1.原料與配方 粗、細(xì)木屑比例適當(dāng)，采用板栗樹(shù)木屑最佳，粗木屑粒徑為2毫米左右，細(xì)木屑為一般圓盤(pán)鋸屑，粗、細(xì)的比例為1∶2，添加干木屑重量20%的麩皮和1%的糖，含水率為60%左右。這樣的基質(zhì)通氣性好，營(yíng)養(yǎng)豐富且供菌絲分解利用的時(shí)間長(zhǎng)，長(zhǎng)到基質(zhì)內(nèi)部的菌絲比包裹在基質(zhì)外部暴露于空氣中的菌絲耐受性強(qiáng)。
不同粒徑的基質(zhì)比例適當(dāng)，還能協(xié)調(diào)氣與水的矛盾。粗粒過(guò)多，架空菌絲多；細(xì)粒過(guò)多，透氣性差，菌絲生長(zhǎng)慢。
應(yīng)用配方如下：栗木屑78%，麩皮20%，石膏1%，蔗糖1%，水65%配料，裝入較粗大的試管中，裝料量為試管的1/3~1/2,1.5千克/厘米2滅菌1.5小時(shí)。冷卻后，接入需保藏的菌種，在28℃下培養(yǎng)，待菌絲長(zhǎng)滿木屑培養(yǎng)基時(shí)取出換上無(wú)菌橡皮塞，在0~5℃冰箱內(nèi)保藏1~2年轉(zhuǎn)管一次。
2.容器與裝量 采用容量250毫升的葡萄糖玻璃瓶，清洗潔凈，裝量一般不超過(guò)玻璃瓶容量的3/5，填料不能過(guò)滿，瓶壁所殘留的顆粒須擦拭干凈，否則保藏的菌種易引起污染。3.滅菌和冷藏 滅菌時(shí)若采用棉塞封口，基質(zhì)表層易失水，接種成活率低，即使菌絲復(fù)活，生長(zhǎng)也很緩慢，所以最好采用聚丙烯膜封口，接種后換用無(wú)菌棉塞培養(yǎng)，待菌絲長(zhǎng)滿后再換成有孔滅菌膠塞冰箱保藏。
用上述方法保藏的菌種經(jīng)3年貯放后，接出成活率均達(dá)90%以上，出菇驗(yàn)證產(chǎn)量及子實(shí)體形態(tài)特征均無(wú)明顯變化。因此，自然基質(zhì)保藏法具有保存期長(zhǎng)，菌種遺傳性能相對(duì)穩(wěn)定的特點(diǎn)。
（三）木粒PDA斜面保藏 灰樹(shù)花在自然狀態(tài)下易發(fā)生于栗樹(shù)根部，這說(shuō)明其營(yíng)養(yǎng)需求較為特殊。根據(jù)灰樹(shù)花這種習(xí)性，在PDA基礎(chǔ)上添加適量的栗樹(shù)木粒制成母種培養(yǎng)基。
在多年的使用中發(fā)現(xiàn)，用該培養(yǎng)基培養(yǎng)的母種生長(zhǎng)勢(shì)好，在轉(zhuǎn)接原種時(shí)，適應(yīng)能力強(qiáng)，萌發(fā)定植快；用作菌種保藏基質(zhì)時(shí)，保藏時(shí)間長(zhǎng)，并能很好保持菌種的優(yōu)良性狀。1.木粒PDA的制作 選取栗樹(shù)邊材，加工成0.3~0.5厘米的顆粒，及時(shí)烘干或曬干備用。
稱(chēng)取葡萄糖10克，KH2PO41克，1溶解于1升清水中配制成營(yíng)養(yǎng)液。將營(yíng)養(yǎng)液倒入盛有木粒的小鋁鍋中，營(yíng)養(yǎng)液以完全浸沒(méi)木粒為準(zhǔn)。
煮沸10分鐘，以加快木粒對(duì)營(yíng)養(yǎng)液的吸收速度，起鍋靜置30分鐘讓木粒吸足營(yíng)養(yǎng)液。撈出木粒，瀝掉表面的水，裝入試管，裝量為試管長(zhǎng)的1/6，最多不得超過(guò)試管長(zhǎng)的1/5，否則在擺制斜面時(shí)，不易使木粒均勻分散于斜面的表面上。
選取新鮮的馬鈴薯，去皮并切成薄片，稱(chēng)取200克放入小鋁鍋中，加入1升清水，文火煮沸30分，趁熱過(guò)濾取汁，并補(bǔ)足1升的體積。稱(chēng)取瓊脂20克，葡萄糖20克，KH2PO4 2克，MgSO47H2O 2克。
先將瓊脂剪碎，加入到馬鈴薯濾液中，繼續(xù)用文火加熱，使瓊脂溶化。待瓊脂完全溶化后，加入稱(chēng)好的其他3種營(yíng)養(yǎng)成分，攪拌使這些物質(zhì)溶解均勻，趁熱裝入已裝有木粒的試管中，裝至試管長(zhǎng)的1/3處，塞上棉塞。
在0.8~1千克/厘米2蒸氣壓下滅菌40分，待氣壓降至0時(shí)，開(kāi)蓋取出，趁熱輕輕抖拍試管，使木粒分散后即可擺制斜面，并使木粒呈半裸狀分布于斜面上，待凝固后便制成了木粒PDA培養(yǎng)基。2.生長(zhǎng)及保藏效果 木粒PDA斜面上培養(yǎng)的灰樹(shù)花母種，菌絲生長(zhǎng)迅速、良好，12天即可長(zhǎng)滿試管，但菌絲的后期生長(zhǎng)勢(shì)更為粗壯、濃密，后勁足。
轉(zhuǎn)接原種時(shí)，菌種適應(yīng)力強(qiáng)，定植快。這表明，灰樹(shù)花菌絲的生長(zhǎng)速度、生長(zhǎng)勢(shì)不僅取決于本身的遺。
2.保藏菌種的方法有哪些
1、傳代培養(yǎng)保藏法：包括又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等，培養(yǎng)后于4-6℃冰箱內(nèi)保存。
2、液體石蠟覆蓋保藏法：液體石蠟覆蓋保藏法是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當(dāng)延長(zhǎng)保藏時(shí)間。
3、載體保藏法：載體保藏法是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進(jìn)行干燥的保藏法。
4、寄主保藏法：寄主保藏法用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的微生物。
5、冷凍干燥保藏法：先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分（真空干燥），其中真空冷凍干燥法最常見(jiàn)。
擴(kuò)展資料
菌種保藏的原理：
菌種保藏有多種方法，其原理大多大同小異，主要是運(yùn)用一些方式盡量降低生物體內(nèi)的代謝，達(dá)到延長(zhǎng)生命，減少變異的目的。通常采用的方法為低溫、缺氧、干燥。
低溫主要對(duì)菌種產(chǎn)生兩方面的影響，首先，較低的溫度可以減緩機(jī)體細(xì)胞的酶活，降低新陳代謝，達(dá)到保藏菌種的目的。其次，低溫同時(shí)會(huì)導(dǎo)致菌體誘發(fā)菌絲自溶機(jī)制，如果降溫過(guò)程失誤，同樣會(huì)造成機(jī)體的機(jī)械損傷和溶質(zhì)損傷。
參考資料來(lái)源：百度百科——菌種保藏
3.微生物菌種保藏的方法有哪些
菌種的優(yōu)劣是食用菌生產(chǎn)成敗的關(guān)鍵。菌種是國(guó)家重要的生物資源，也是微生物工廠首要的生產(chǎn)資料。由于微生物繁殖快、易變異，因此微生物菌種特別需要妥善保藏。世界各國(guó)對(duì)微生物菌種都很重視。中國(guó)科學(xué)院微生物研究所專(zhuān)門(mén)設(shè)立了菌種的保藏機(jī)構(gòu)，為各生產(chǎn)單位收藏和供應(yīng)各種優(yōu)良菌種。當(dāng)然就具體的生產(chǎn)單位而言，大量的生產(chǎn)用菌種還得靠自己來(lái)生產(chǎn)和保藏。
菌種保藏的目的：是使優(yōu)良菌種經(jīng)過(guò)較長(zhǎng)時(shí)間后，仍能保持菌種的優(yōu)良性狀、生活能力及純度，降低菌種的衰亡速度，確保菌種的純一，防止雜菌污染及絕種。
保藏菌種的方法：人們?cè)陂L(zhǎng)期的生產(chǎn)實(shí)踐中，積累了不少保藏菌種的經(jīng)驗(yàn)，常用的保藏方法有：斜面低溫保藏法、液體石蠟保藏法、砂土管保藏法、濾紙片保藏法、谷粒保藏法等。常用保藏菌種的方法有以下幾種：
(1)斜面低溫保藏法這是最簡(jiǎn)單最普通的保藏方法。首先將菌種在適宜的斜面培養(yǎng)基（一般PDA）上培養(yǎng)成熟后，選擇菌絲生長(zhǎng)粗壯，邊緣保存。一般保存溫度4~6℃，除草菇和銀耳菌種外（10~15℃），此方法對(duì)其他食用菌都適宜，一般菌種可保藏2~4個(gè)月，所以需定時(shí)移接。此法保藏雖然方便，但是保藏時(shí)間短，需經(jīng)常轉(zhuǎn)管，也很容易發(fā)生衰退變異現(xiàn)象。因此，不能用作長(zhǎng)期保藏，最好與其他方法結(jié)合起來(lái)保藏。
另外，為了減少保藏期間培養(yǎng)基水分蒸發(fā)，瓊脂最好加到2.5%。為防止菌種在保藏過(guò)程中產(chǎn)酸分的積累，應(yīng)加入0.2%的磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀等緩沖鹽類(lèi)，同時(shí)，培養(yǎng)成熟后，最好將棉塞管口外剪平，并用礦蠟封或換以無(wú)菌木塞，這樣做也可以減少培養(yǎng)基水分的散失，延長(zhǎng)保存時(shí)間。
在農(nóng)村如果沒(méi)有冰箱，可采用土法保藏。即把保藏用的斜面菌種換上無(wú)菌橡皮塞，并用礦燭蠟封后密閉的廣口瓶中，懸入井底保藏。（2）貯藏室保藏法原種和栽培種一般只在貯藏室短期保藏，貯藏室溫度0~10℃為好。室內(nèi)應(yīng)清潔、干燥、無(wú)光，應(yīng)經(jīng)常檢查溫度和濕度，以降低其生活力，減少變異退化，防止雜菌污染，避免過(guò)早出菇。溫度越高，保存的時(shí)間越短。
4.菌種保藏的目的、原理及常用的方法有哪些
菌種保藏方法大全 基本原理 微生物具有容易變異的特性，因此，在保藏過(guò)程中，必須使微生物的代謝處于最不活躍或相對(duì)靜止的狀態(tài)，才能在一定的時(shí)間內(nèi)使其不發(fā)生變異而又保持生活能力。
低溫、干燥和隔絕空氣是使微生物代謝能力降低的重要因素，所以，菌種保藏方法雖多，但都是根據(jù)這三個(gè)因素而設(shè)計(jì)的。 保藏方法大致可分為以下幾種： 1.傳代培養(yǎng)保藏法 又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等（后者作保藏厭氧細(xì)菌用），培養(yǎng)后于4—6℃冰箱內(nèi)保存。
2.液體石蠟覆蓋保藏法 是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當(dāng)延長(zhǎng)保藏時(shí)間，它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋滅菌的液體石蠟，一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進(jìn)入，以減弱代謝作用。3.載體保藏法 是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進(jìn)行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛。
4.寄主保藏法 用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等，它們必須在生活的動(dòng)物、昆蟲(chóng)、雞胚內(nèi)感染并傳代，此法相當(dāng)于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進(jìn)行保藏。
5.冷凍保藏法 可分低溫冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速凍結(jié)（約-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。 6.冷凍干燥保藏法 先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分（真空干燥）。
有些方法如濾紙保藏法、液氮保藏法和冷凍干燥保藏法等均需使用保護(hù)劑來(lái)制備細(xì)胞懸液，以防止因冷凍或水分不斷升華對(duì)細(xì)胞的損害。保護(hù)性溶質(zhì)可通過(guò)氫和離子鍵對(duì)水和細(xì)胞所產(chǎn)生的親和力來(lái)穩(wěn)定細(xì)胞成分的構(gòu)型。
保護(hù)劑有牛乳、血清、糖類(lèi)、甘油、二甲亞砜等。 三、器材 細(xì)菌、酵母菌，放線菌和霉菌； 肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基，滅菌脫脂牛乳，滅菌水，化學(xué)純的液體石蠟，甘油，五氧化二磷，河沙，瘦黃土或紅土，冰塊、食鹽，干冰，95%酒精，10%鹽酸，無(wú)水氯化鈣； 滅菌吸管，滅菌滴管，滅菌培養(yǎng)皿，管形安瓿管，淚滴形安瓿管（長(zhǎng)頸球形底），40目與 100目篩子，油紙，濾紙條（0.5*1.2cm），干燥器，真空泵，真空壓力表，噴燈，L形五通管，冰箱，低溫冰箱（-30℃），液氮冷凍保藏器。
四、操作步驟、各保藏法的應(yīng)用范圍及優(yōu)缺點(diǎn) 下列各法可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室具體條件與需要選做。 1.斜面低溫保藏法 將菌種接種在適宜的固體斜面培養(yǎng)基上，待菌充分生長(zhǎng)后，棉塞部分用油紙包扎好，移至2—8℃的冰箱中保藏。
保藏時(shí)間依微生物的種類(lèi)而有不同，霉菌、放線菌及有芽孢的細(xì)菌保存2—4個(gè)月，移種一次。酵母菌兩個(gè)月，細(xì)菌最好每月移種一次。
此法為實(shí)驗(yàn)室和工廠菌種室常用的保藏法，優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單，使用方便，不需特殊設(shè)備，能隨時(shí)檢查所保藏的菌株是否死亡、變異與污染雜菌等。缺點(diǎn)是容易變異，因?yàn)榕囵B(yǎng)基的物理、化學(xué)特性不是嚴(yán)格恒定的，屢次傳代會(huì)使微生物的代謝改變，而影響微生物的性狀；污染雜菌的機(jī)會(huì)亦較多。
2.液體石蠟保藏法 （1）將液體石蠟分裝于三角燒瓶?jī)?nèi)，塞上棉塞，并用牛皮紙包扎，1.05kg/cm2>,121.3℃滅菌30分鐘，然后放在40℃溫箱中，使水汽蒸發(fā)掉，備用。 （2）將需要保藏的菌種，在最適宜的斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使得到健壯的菌體或孢子。
（3）用滅菌吸管吸取滅菌的液體石蠟，注入已長(zhǎng)好菌的斜面上，其用量以高出斜面頂端1cm為準(zhǔn)（圖Ⅶ-12），使菌種與空氣隔絕。 （4）將試管直立，置低溫或室溫下保存（有的微生物在室溫下比冰箱中保存的時(shí)間還要長(zhǎng)）。
此法實(shí)用而效果好。霉菌、放線菌、芽孢細(xì)菌可保藏2年以上不死，酵母菌可保藏1—2年，一般無(wú)芽孢細(xì)菌也可保藏1年左右，甚至用一般方法很難保藏的腦膜炎球菌，在37℃溫箱內(nèi)，亦可保藏3個(gè)月之久。
此法的優(yōu)點(diǎn)是制作簡(jiǎn)單，不需特殊設(shè)備，且不需經(jīng)常移種。缺點(diǎn)是保存時(shí)必須直立放置，所占位置較大，同時(shí)也不便攜帶。
從液體石蠟下面取培養(yǎng)物移種后，接種環(huán)在火焰上燒灼時(shí)，培養(yǎng)物容易與殘留的液體石蠟一起飛濺，應(yīng)特別注意。 3.濾紙保藏法 （1）將濾紙剪成0.5*1.2cm的小條，裝入0.6*8cm的安瓿管中，每管1—2張，塞以棉塞，1.05kg/cm2>,121.3℃滅菌30分鐘。
（2）將需要保存的菌種，在適宜的斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，使充分生長(zhǎng)。 （3）取滅菌脫脂牛乳1—2ml滴加在滅菌培養(yǎng)皿或試管內(nèi)，取數(shù)環(huán)菌苔在牛乳內(nèi)混勻，制成濃懸液。
（4）用滅菌鑷子自安瓿管取濾紙條浸入菌懸液內(nèi)，使其吸飽，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。 （5）將安瓿管放入內(nèi)有五氧化二磷作吸水劑的干燥器中，用真空泵抽氣至干。
（6）將棉花塞入管內(nèi)，用火焰按圖Ⅶ-13熔封，保存于低溫下。 （7）需要使用菌種，復(fù)活培養(yǎng)時(shí)，可將安瓿管口在火焰上燒熱，滴一滴冷水在燒熱的部位，使玻璃破裂，再用鑷子敲掉口端的玻璃，待安瓿管開(kāi)啟后，取出濾紙，放入液體培養(yǎng)基內(nèi)，置溫箱中培養(yǎng)。
細(xì)菌、酵母菌、絲狀真菌均可用此法保藏，前兩者可保藏2年左右，有些絲狀真菌甚至可保藏14—17年之久。此法較液氮、冷凍干燥法簡(jiǎn)便，不需要特殊設(shè)備。
4.沙土保藏法 。
5.菌種保藏方法有哪些
菌種保藏方法很多，常用的有繼代培養(yǎng)低溫保藏、液體石蠟覆蓋保藏、蒸餾水覆蓋低溫保藏、超低溫冰箱保藏和液氮超低溫凍結(jié)保藏。
（1）繼代培養(yǎng)低溫保藏：將菌種放在4℃?6℃恒溫箱中保藏3?6個(gè)月，然后重新進(jìn)行移接，移接后再放回恒溫箱繼續(xù)保藏。此法是目前普遍采用的方法，優(yōu)點(diǎn)是應(yīng)用儀器設(shè)備簡(jiǎn)單，操作方便，簡(jiǎn)便易行。
缺點(diǎn)是菌種退化快，較長(zhǎng)時(shí)間保藏后常出現(xiàn)菌絲生長(zhǎng)緩慢，甚至不能生長(zhǎng)現(xiàn)象，有的品種還會(huì)形成色素。 （2）液體石蠟覆蓋保藏：將無(wú)菌的液體石蠟覆蓋于菌種斜面表面，隔絕菌種的氧氣供應(yīng)，以控制生長(zhǎng)，減緩老化，減少變異。
此法有時(shí)會(huì)出現(xiàn)大量分泌色素、發(fā)生角變、菌絲變稀變?nèi)?、生長(zhǎng)不正常等問(wèn)題。 （3）蒸餾水覆蓋低溫保藏：將無(wú)菌蒸餾水注入需保藏菌種的斜面菌種內(nèi)，然后把菌袋（瓶）直立放置于4℃?6℃恒溫箱保藏。
此法常被用作菌種的短期保藏，1年左右需要繼代培養(yǎng)1次。 （4）超低溫冰箱保藏：此法需要超低溫冰箱，溫度控制在-76℃?-80℃，可以長(zhǎng)期保藏。
（5）液氮超低溫凍結(jié)保藏：此法是將菌種置于保護(hù)劑中，經(jīng)程序降溫至-90℃，將菌種置于液氮容器中長(zhǎng)期保藏。
6.食用菌的菌種有哪些保藏方法
(1)斜面低溫保藏。是一種最常用、最簡(jiǎn)便的菌種保藏方法。首先將需要保藏的菌種接到斜面培養(yǎng)基上，在適宜的溫度條下培養(yǎng)，當(dāng)菌絲健壯地長(zhǎng)滿斜面時(shí)，即將此試管菌種取出，放置于4 ℃的冰箱中保藏。特點(diǎn)：
①簡(jiǎn)單易行，適用于各類(lèi)菇類(lèi)菌種保藏，是目前生產(chǎn)及科研普遍采用的一種方法；②保藏時(shí)間短，需6個(gè)月轉(zhuǎn)接一次，轉(zhuǎn)管次數(shù)多菌絲變異的可能性大；③如改用橡皮塞并用石蠟扣，可保藏1年~3年。
(2)液體石蠟保藏。液體石蠟保藏也稱(chēng)為礦油保藏，即用礦油覆蓋試管斜面試管保藏的方法。礦油是指無(wú)色、透明、黏稠、性質(zhì)穩(wěn)定、不易被微生物分解的石蠟油和液體石蠟，將其覆蓋在斜面菌種之上，可以隔絕空氣，防治培養(yǎng)基水分蒸發(fā)，抑制微生物的代謝活動(dòng)，推遲細(xì)胞老化，從而達(dá)到長(zhǎng)期保藏菌種的目的。特點(diǎn)：
①方法簡(jiǎn)便易行，保藏條件不嚴(yán)格，保藏時(shí)間長(zhǎng)，可作為長(zhǎng)期保藏菌種的方法；②菌種必須垂直放，放置不方便。
(3)濾紙保藏。濾紙保藏是一種以無(wú)菌濾紙作為食用菌孢子吸附載體長(zhǎng)期保藏菌種的方法，又稱(chēng)濾紙孢子保藏法。特點(diǎn)：技術(shù)要求高，設(shè)備費(fèi)用大，菌種不易衰老退化，菌種保藏時(shí)間長(zhǎng)很少變異。
(4)自然基質(zhì)保藏。自然基質(zhì)保藏就是以不含毒性、刺激性和抑菌性而富含營(yíng)養(yǎng)的自然生長(zhǎng)的基質(zhì)作培養(yǎng)基來(lái)保藏菌種的方法。自然基質(zhì)很多，食用菌常用的自然基質(zhì)有發(fā)酵的糞草、木屑及枝條基質(zhì)等，取材方便，制作方法簡(jiǎn)便，保藏時(shí)間也較長(zhǎng)。使用時(shí)，只需取一塊、一粒或一條培養(yǎng)物放在新鮮的培養(yǎng)基上，并在適溫下培養(yǎng)即可。特點(diǎn)：方法簡(jiǎn)便易行，保藏時(shí)間長(zhǎng)。
7.菌種的保藏有哪些方法
為了保持菌種的純凈，常需要進(jìn)行 菌種的保藏。
菌種的保藏分為臨時(shí)保藏 和長(zhǎng)期保藏。 1. 臨時(shí)保藏 臨時(shí)保藏常用于頻繁使用的菌種。
首先將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng) 基上，在合適的溫度下培養(yǎng)。當(dāng)菌落長(zhǎng) 大后，將試管放入4 °c的冰箱中保藏。
以后每3?6個(gè)月，都要重新將菌種從舊 的培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)基上。不 過(guò)此方法保存時(shí)間不長(zhǎng)，菌種容易被污 染或產(chǎn)生變異。
2. 長(zhǎng)期保藏 長(zhǎng)期保藏常用于需要長(zhǎng)期保存的菌 種，采用的是甘油管藏的方法。在3 mL 的甘油瓶中，裝入lmL甘油后滅菌。
將 1 mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘 油充分混合均勻后，放在一20 °C的冷凍 箱中保存。
