根系活力測定TTC法(TTC法測定根系活力的標(biāo)準(zhǔn)方程,在線等!~)
1.TTC法測定根系活力的標(biāo)準(zhǔn)方程,在線等!~
物根系是活躍的吸收器官和合成器官，根的生長情況和活力水平直接影響地上部的營養(yǎng)狀況及產(chǎn)量水平。本實驗練習(xí)測定根系活力的方法，為植物營養(yǎng)研究提供依據(jù)。
一、原理
氯化三苯基四氮唑（TTC）是標(biāo)準(zhǔn)氧化電位為80 mV的氧化還原色素，溶于水中成為無色溶液，但還原后即生成紅色而不溶于水的三苯甲 （TTF），如下式：
生成的三苯甲 （TTF）比較穩(wěn)定，不會被空氣中的氧自動氧化，所以TTC被廣泛用作酶試驗的氫受體，植物根系中脫氫酶所引起的TTC還原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、蘋果酸得到增強(qiáng)，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC還原量能表示脫氫酶活性，并作為根系活力的指標(biāo)。
二、實驗材料、試劑與儀器設(shè)備
（一）實驗材料
水培或砂培小麥、玉米等植物根系。
（二）試劑
1. 乙酸乙酯（分析純）。
2. 次硫酸鈉（Na2S2O4，分析純），粉末。
3. 1%TTC溶液：準(zhǔn)確稱取TTC 1.0 g，溶于少量水中，定容到100 mL。用時稀釋至需要的濃度。
4. 磷酸緩沖液（1/15 mol/L,pH7.0）。
5. 1 mol/L硫酸：用量筒取比重1.84的濃硫酸55 mL，邊攪拌邊加入盛有500 mL蒸餾水的燒杯中，冷卻后稀釋至1000 mL。
6. 0.4 mol/L琥珀酸：稱取琥珀酸4.72 g，溶于水中，定容至100 mL即成。
（三）儀器設(shè)備
小燒杯3個，研缽1個，移液管：0.5 mL 1支、10 mL 1支、5 mL 3支，刻度試管6支，分光光度計，分析天平（感量0.1 mg），電子頂載天平（感量0.1 g），溫箱，試管架，藥勺，石英砂適量，濾紙。
三、實驗步驟
1. 定性測定
(1)配制反應(yīng)液 把1% TTC溶液、0.4 mol/L的琥珀酸和磷酸緩沖液按1:5:4比例混合。
(2)把根仔細(xì)洗凈，把地上部分從莖基部切除。將根放入三角瓶中，倒入反應(yīng)液，以浸沒根為度，置37℃左右暗處放1~3 h，以觀察著色情況，新根尖端幾毫米以及細(xì)側(cè)根都明顯地變成紅色，表明該處有脫氫酶存在。
2. 定量測定
(1)TTC標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 取0.4% TTC溶液0.2 mL放入大試管中，加9.8 mL乙酸乙酯，再加少許Na2S2O4粉末搖勻，則立即產(chǎn)生紅色的TTF。此溶液濃度為每毫升含有TTF 80 μg。分別取此溶液0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL置10 mL刻度試管中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含TTF 20 μg、40 μg、80 μg、120 μg、160 μg的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，以乙酸乙酯作參比，在485 nm波長下測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
(2)稱取根尖樣品0.5 g，放入小燒杯中，加入0.4% TTC溶液和磷酸緩沖液（pH7.0）各5 mL，使根充分浸沒在溶液內(nèi)，在37℃下暗保溫1~2 h，此后立即加入1 mol/L硫酸2 mL，以停止反應(yīng)。（與此同時做一空白實驗，先加硫酸，再加根樣品，37℃下暗保溫后不加硫酸，其溶液濃度、操作步驟同上）。
(3)把根取出，用濾紙吸干水分，放入研缽中，加乙酸乙酯3~4 mL，充分研磨，以提出TTF。把紅色提取液移入刻度試管，并用少量乙酸乙酯把殘渣洗滌2~3次，皆移入刻度試管，最后加乙酸乙酯使總量為10 mL，用分光光度計在波長485 nm下比色，以空白試驗作參比測出吸光度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可求出TTC還原量。
四、結(jié)果計算
根系活力= C/(1000*W*h) [mg TTF/(g?h)]
式中：C——四氮唑還原量，μg。
W——根重，g。
h——時間，h。
2.測定根系活力數(shù)據(jù)有什么規(guī)律
你好，將碑酸級二鈉注入土中范圍較小的一定部位，一株作物只注入一點，再選擇作物的一定部位測其放射性，即可獲得作物某一生長時期的根活力。
所側(cè)數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理后列表、繪圖可得到清晰的根活力分布圖、測定時需用小型野升定標(biāo)器，我們使用的是國產(chǎn)DBX一1定標(biāo)器，該儀器體積小、重量輕、靈敏度高、數(shù)碼管顯示。使用這種方法和儀器在油菜、水稻上側(cè)定根系活力得到了較滿意的結(jié)果。
側(cè)定方法：以磷酸氫二鈉為指示劑，早田使用N幻H.名PO；不需特殊處理，水田操作時則要將Na:H二PO'用陰離子交換樹脂或泥團(tuán)吸附。 Na:H二PO'用非放射性磷酸鹽稀釋，每洞注入1 ml左右，滲透范圍約1 cm，放射性強(qiáng)度依測定時間長短而定。
每株施入的P:O。量經(jīng)計算小于每畝施磷量的l%。
標(biāo)記部位應(yīng)形成一個立體面。在離植株主莖水平距離5 cm、10cm處的東、西、南、北四個方位的三個深度打洞，。
3.紅墨水法和TTC法測定種子活力有什么不同
TTC染的是活細(xì)胞，紅墨水染的是死細(xì)胞。
TTC法：凡有生命活力的種子胚部，在呼吸作用過程中都有氧化還原反應(yīng)，而無生命活力的種胚則無此反應(yīng)。當(dāng)TTC滲入種胚的活細(xì)胞內(nèi)并被還原時，便由無色的TTC變?yōu)榧t色的TTF。
紅墨水法：凡生活細(xì)胞的原生質(zhì)膜具有選擇性吸收物質(zhì)的能力，而死的種胚細(xì)胞原生質(zhì)膜喪失這種能力，于是染料便能進(jìn)入死細(xì)胞而染色。
擴(kuò)展資料
TTC法的原里：
凡有生活力的種子胚部在呼吸作用過程中都有氧化還原反應(yīng)，而無生活力的種胚則無此反應(yīng)。
當(dāng)TTC溶液滲入種胚的活細(xì)胞內(nèi)，并作為氫受體被脫氫輔酶（NADH或NADPH）還原時，可產(chǎn)生紅色的三苯基甲（TTF），胚便染成紅色。
當(dāng)種胚生活力下降時，呼吸作用明顯減弱，脫氫酶的活性亦大大下降，胚的顏色變化不明顯，故可由染色的程度推知種子的生活力強(qiáng)弱。TTC還原反應(yīng)如下：TTC（無色），TTF（紅色）。
參考資料來源：搜狗百科-TTC法
