中藥注射滅菌方法(制備中藥注射劑的常用方法)

1.制備中藥注射劑的常用方法有哪些

中藥注射劑是以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，采用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)和方法，從中藥、天然藥物的單方、復(fù)方制劑中提取的有效物質(zhì)制成滅菌制劑，是臨床中治療急重癥的一種較好的速效制劑。

它改變了以往中醫(yī)中藥傳統(tǒng)的給藥方式，結(jié)合了注射劑劑量準(zhǔn)確、療效迅速獨(dú)特的劑型優(yōu)點(diǎn)，給臨床使用中草藥帶來(lái)了更廣闊的前景。近年來(lái)，中藥注射劑品種日益增多，使用范圍愈加廣泛，在其制備技術(shù)及質(zhì)量控制等方面均有所發(fā)展與提高。

但由于中藥材原料品種、產(chǎn)地、成分本身的復(fù)雜性，中藥注射劑的組分、劑量的特殊性及制備工藝、分析技術(shù)的限制等原因，近年來(lái)在臨床用藥中發(fā)現(xiàn)中藥注射劑滅菌后或在貯存過(guò)程中產(chǎn)生色澤變深、渾濁、沉淀、乳光、澄明度降低，甚至降低藥物療效、影響臨床使用等現(xiàn)象。澄明度是中藥注射劑穩(wěn)定性考核項(xiàng)目之一，也是評(píng)價(jià)其質(zhì)量的主要指標(biāo)，應(yīng)該符合《中國(guó)藥典》的規(guī)定。

現(xiàn)試分析影響中藥注射劑澄明度的因素，并提出解決法。1影響中藥注射劑澄明度的主要原因1.1雜質(zhì)的存在中藥注射劑成分復(fù)雜，各廠家制備工藝不同，使有效成分的提取和雜質(zhì)除盡有較大的差異。

一般按有效成分或有效部位組方、投料的注射液，澄明度比較好，用凈藥組方、總提取物投料的注射液由于是多種成分的混合液，一些高分子化合物如色素、鞣質(zhì)、淀粉、蛋白質(zhì)、樹(shù)膠、果膠、黏液質(zhì)、樹(shù)脂等以膠態(tài)形式存在于藥液中。這些高分子化合物具熱力學(xué)不穩(wěn)定性及動(dòng)力學(xué)不穩(wěn)定性，致使中藥注射液在加熱滅菌時(shí)的高溫下及放置過(guò)程中，會(huì)因膠粒凝結(jié)而產(chǎn)生藥液渾濁或沉淀。

例如：鞣質(zhì)為多元酚的衍生物，溶于水和乙醇，具有還原性，其水溶液因加熱或長(zhǎng)時(shí)間放置，會(huì)氧化、聚合生成不溶于水的沉淀。鞣質(zhì)具收斂性，能與蛋白質(zhì)形成不溶性鞣酸蛋白，肌注含鞣質(zhì)的注射液，局部組織能產(chǎn)生硬結(jié)，并有牽引痛和壓迫痛。

乳光的產(chǎn)生常由于含揮發(fā)油成分的水溶性較差及成分復(fù)雜，或該成分含酚、醛活性基團(tuán)，遇光及空氣易被氧化聚合引起，同時(shí)尚可出現(xiàn)沉淀及藥液色澤變深。1.2pH值的改變藥液的pH值與注射液澄明度關(guān)系很大。

中藥中某些成分的溶解度與溶液的pH相關(guān)，若pH不適當(dāng)，則易使其穩(wěn)定性下降，產(chǎn)生沉淀。有效成分是生物堿、有機(jī)酸、酚類、苷類的，在一定的pH值條件下較為穩(wěn)定，若pH值改變，它們的溶解度也發(fā)生改變。

若pH值調(diào)節(jié)不當(dāng)，藥液的堿性較強(qiáng)時(shí)，生物堿易析出；反之，酸性較強(qiáng)時(shí)，酸性成分及部分苷類易沉淀。另外，在加熱滅菌或貯存過(guò)程中，由于一些成分易水解，如酯、苷類；一些成分易氧化，如醛類；一些成分易聚合，如酚類；從而產(chǎn)生酸性物質(zhì)使溶液的pH值逐漸下降而使原已溶解的有效成分又析出。

1.3藥液濃度過(guò)高中藥注射劑一般濃度越高，則藥液顏色愈深，溶液中有效成分及雜質(zhì)的含量也愈高。如不同濃度的復(fù)方丹參注射液在5%葡萄糖溶液中的微粒數(shù)，會(huì)隨著濃度的增加而增加。

有的注射劑雖然配制時(shí)藥液可暫時(shí)處于穩(wěn)定狀態(tài)，若溫度、pH值等條件出現(xiàn)變化，則原來(lái)已溶解的成分又析出，澄明度下降。

2.中藥注射劑滅菌應(yīng)遵循的原則是什么

一、藥學(xué)部分 1、關(guān)于“生產(chǎn)工藝”資料的要求 （1）“生產(chǎn)工藝”內(nèi)容的詳細(xì)程度。

該文件的詳細(xì)程度應(yīng)可以讓具備相應(yīng)知識(shí)的相關(guān)藥學(xué)人員能夠生產(chǎn)出質(zhì)量符合要求的產(chǎn)品，該文件可有利于保證不同批次產(chǎn)品質(zhì)量的一致性，并可作為相關(guān)核查或檢查的依據(jù)。 （2）對(duì)于原輔料等要求的體現(xiàn)。

經(jīng)討論認(rèn)為，可在“生產(chǎn)工藝”后面以附注的形式，明確對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量有明顯影響的相關(guān)要求，如原料、輔料、生產(chǎn)所用澄清劑、吸附劑，以及關(guān)鍵設(shè)備等。若附注較多可以編號(hào)。

如；附件1：**藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（明確藥材的產(chǎn)地、藥用部位、采收期、炮制方法和條件、質(zhì)量要求等）；附件2、**輔料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；附件3：生產(chǎn)中所用到的澄清劑、吸附劑等的要求；附件4：關(guān)鍵設(shè)備（如超濾膜的型號(hào)、關(guān)鍵參數(shù)等），等等。同時(shí)，可在制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后注明所用藥材的基原及藥用部位。

（3）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)【制法】項(xiàng)撰寫(xiě)的要求。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中所列項(xiàng)目的具體要求留待以后規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)時(shí)統(tǒng)一處理，暫時(shí)不變。

2、關(guān)于工藝驗(yàn)證的要求目前工藝驗(yàn)證的評(píng)價(jià)內(nèi)容主要以注射劑的滅菌工藝為宜，其他內(nèi)容待認(rèn)識(shí)不斷豐富后再要求。 3、滅菌工藝的要求 中藥注射劑滅菌工藝的技術(shù)要求一般可參照化學(xué)藥的要求，但是，需考慮中藥注射劑的特點(diǎn)。

應(yīng)優(yōu)先選用無(wú)菌保證程度較高且不影響產(chǎn)品穩(wěn)定性的滅菌工藝。如有充分依據(jù)證明申請(qǐng)品種不適宜終端滅菌且為臨床必須的品種，可考慮選擇濾過(guò)除菌、無(wú)菌生產(chǎn)工藝。

通常無(wú)菌生產(chǎn)工藝僅限于粉針劑及部分小容量注射劑。在選擇滅菌工藝條件時(shí)，應(yīng)采用指紋圖譜、含量測(cè)定、可見(jiàn)異物等指標(biāo)，全面考察滅菌工藝對(duì)注射劑質(zhì)量的影響。

4、輔料與藥物的相容性 相容性試驗(yàn)應(yīng)重點(diǎn)考察以下情況：（1）新輔料與藥物之間的相互作用；（2）輔料對(duì)性質(zhì)不穩(wěn)定藥物的影響；（3）已有文獻(xiàn)資料顯示，輔料與藥物之間可能存在的不良相互作用。輔料與藥物的相容性考察，應(yīng)采用指紋圖譜、含量測(cè)定、雜質(zhì)等指標(biāo)，重點(diǎn)考察加入輔料前后的改變。

5、口服樣品制備工藝合理性的評(píng)價(jià) 為了說(shuō)明注射給藥途徑的合理性，需進(jìn)行注射與口服途徑的藥效對(duì)比研究。此時(shí)，口服給藥樣品制備工藝的合理性判斷原則上同一般新藥。

對(duì)于有效成分、有效部位而言，可直接以有效成分或有效部位的提取轉(zhuǎn)移率為指標(biāo)進(jìn)行工藝優(yōu)選。對(duì)于源于臨床的中藥復(fù)方，可采用與臨床用藥相同的工藝，如湯劑可直接采用水煎工藝（需考慮合煎的配伍禁忌等）等，或按照新藥研究的原則與方法研究后確定，此外，需關(guān)注已知有效成分的提取情況以及工藝參數(shù)的合理性等。

二、藥理毒理部分 1、關(guān)于多成分中藥注射劑非臨床藥代動(dòng)力學(xué)探索性研究的要求 中藥注射劑藥代動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果對(duì)臨床試驗(yàn)方案的設(shè)計(jì)、臨床合理用藥有很大的指導(dǎo)意義。經(jīng)討論認(rèn)為，申報(bào)臨床研究的多成分中藥注射劑應(yīng)盡可能對(duì)其中的主要有效成分、毒性成分進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)研究。

已完成臨床試驗(yàn)申報(bào)生產(chǎn)的多成分制成的注射劑，原則上不再要求補(bǔ)充動(dòng)物的藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)研究。 2、關(guān)于首次用于注射途徑原料的有關(guān)說(shuō)明，以及進(jìn)行遺傳毒性、生殖毒性及致癌性試驗(yàn)的問(wèn)題經(jīng)討論認(rèn)為，中藥注射劑原料是指處方中的藥材、飲片、提取物、有效部位、有效成分。

中藥注射劑的原料未曾在已上市中藥注射劑中使用過(guò)的，或雖使用過(guò)，但由于制備工藝不同導(dǎo)致物質(zhì)基礎(chǔ)發(fā)生變化的，均需要提供遺傳毒性、生殖毒性等試驗(yàn)資料，必要時(shí)尚需提供致癌性試驗(yàn)資料。 關(guān)于遺傳毒性、生殖毒性等特殊毒性試驗(yàn)資料階段性提供的問(wèn)題。

經(jīng)討論認(rèn)為，原料為新的有效成分的注射劑，原料來(lái)源于新的藥材的注射劑，應(yīng)在上市前完成全部的生殖毒性試驗(yàn)和遺傳毒性試驗(yàn)。目前已獲臨床批件的其他符合上述需要進(jìn)行試驗(yàn)的受試物均應(yīng)完成遺傳毒性試驗(yàn)，并在上市前應(yīng)完成I段生殖毒性試驗(yàn)和至少一種動(dòng)物的Ⅱ段生殖毒性試驗(yàn)；對(duì)于未完成全部生殖毒性試驗(yàn)的，批準(zhǔn)上市時(shí)應(yīng)在說(shuō)明書(shū)中注明“本品沒(méi)有完成全部生殖毒性試驗(yàn)，未觀察對(duì)子代的安全性”；上市后，繼續(xù)完成其他段的生殖毒性試驗(yàn)。

致癌性試驗(yàn)可根據(jù)藥效學(xué)試驗(yàn)、長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)、遺傳毒性試驗(yàn)、生殖毒性試驗(yàn)結(jié)果，以及臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)的可疑情況確定是否需要進(jìn)行。 3、申報(bào)臨床試驗(yàn)的注射劑在非臨床有效性研究中，增加口服或其他非注射給藥途徑進(jìn)行對(duì)照的原則要求原則上，用于對(duì)照的口服或其他非注射給藥途徑的受試物，應(yīng)采用適合具體給藥途徑的合理的制備工藝，非注射給藥途徑與注射給藥途徑的給藥劑量應(yīng)通過(guò)各自的預(yù)試驗(yàn)來(lái)確定，不得采用有效劑量以下的劑量，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)進(jìn)行全面的分析，以充分說(shuō)明選擇注射給藥途徑的合理性。

三、臨床部分 1、立題依據(jù)、風(fēng)險(xiǎn)控制計(jì)劃及臨床對(duì)照相關(guān)問(wèn)題 關(guān)于完成臨床試驗(yàn)現(xiàn)已申報(bào)生產(chǎn)的品種，對(duì)立題依據(jù)方面不做進(jìn)一步要求，但需要補(bǔ)充風(fēng)險(xiǎn)控制計(jì)劃。對(duì)于處方中含有已上市中藥注射劑處方的品種，若原批件要求進(jìn)行對(duì)比性研究，則申報(bào)單位必須按批件要求進(jìn)行相關(guān)研究。

2、臨床試驗(yàn)相關(guān)要求 中藥注射劑臨床研究的樣本數(shù)應(yīng)符合法規(guī)規(guī)定的最低病例數(shù)要求和生物統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，臨床試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)具有生物統(tǒng)計(jì)學(xué)意義和臨床意義。對(duì)已獲得臨床研究批件，。

3.滅菌方法有哪些

1.干熱滅菌法

1.1灼燒與火焰滅菌：灼燒主要是用于接種工具滅菌，在火焰上灼燒即可達(dá)到徹底滅菌，火焰滅菌通常用于無(wú)菌操作中，將試管口、玻璃瓶口、硅氟塑料塞等反復(fù)通過(guò)火焰數(shù)次，利用火焰對(duì)管口等進(jìn)行滅菌，阻止管口污染，作為無(wú)菌操作過(guò)程中的輔助滅菌手段。

1.2干烤滅菌：利用熱輻射及干熱空氣進(jìn)行滅菌。一般將待檢滅菌的物品如金屬、玻璃、陶瓷制品包裝后，均可在烤箱內(nèi)干熱滅菌。通常加熱至160℃，保溫2h可完全滅菌。但不宜超過(guò)170℃，玻璃量具易變形。降溫過(guò)速，驟冷易引起玻璃器皿炸裂。干熱滅菌時(shí)裝入干烤箱內(nèi)的物品切勿緊密，應(yīng)有空隙，利于熱空氣流動(dòng)，過(guò)密，致使溫度不均，部分物品滅菌不徹底。

2.濕熱滅菌法

通過(guò)加壓提高蒸汽溫度，用高壓蒸汽滅菌，穿透力強(qiáng)，溫度高，滅菌效果最好。

注意事項(xiàng)：1.完全排除高壓滅菌器內(nèi)的冷空氣。有冷空氣存在時(shí)，在同一表壓下所達(dá)到的溫度值要低，而冷空氣排出越少，溫度就低得越多。在高壓蒸汽滅菌時(shí)，為保證達(dá)到規(guī)定的溫度，必須將冷空氣完全排除。否則，雖然壓力達(dá)到，而溫度達(dá)不到規(guī)定的要求，滅菌就不徹底。

3.紫外線 殺菌譜廣，但穿透力弱，影響因素多，殺菌效能受到一定限制。

紫外線消毒效果與紫外線強(qiáng)度、照射時(shí)間、溫度與濕度等因素有關(guān)。

我國(guó)規(guī)定紫外燈照射強(qiáng)度距離1m處不低于70μw/cm2。一般紫外燈使用超過(guò)100h，則應(yīng)更換。表面有塵土，降低滅菌效果。紫外燈殺菌的溫度以20~40℃，相對(duì)濕度40%~60%為宜。

4.常用的滅菌方法有哪些,各有哪些優(yōu)缺點(diǎn)

(1)加熱滅菌法 利用高溫來(lái)殺死微生物（超過(guò)最高生長(zhǎng)溫度）的方法。

加熱滅菌的原理：當(dāng)高溫作用于微生物時(shí)，首先引起細(xì)胞內(nèi)生理生化反應(yīng)速率加快，機(jī)體內(nèi)對(duì)溫度敏感的物質(zhì)如蛋白質(zhì)、核酸等，隨著溫度的增高而遭受不可逆的破壞，盡而導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)原生質(zhì)體的變化、酶結(jié)構(gòu)的破壞，從而使細(xì)胞失去了生活機(jī)能上的協(xié)調(diào)，停止了生長(zhǎng)發(fā)育。隨著高溫的繼續(xù)作用，細(xì)胞內(nèi)原生質(zhì)便發(fā)生凝固，酶結(jié)構(gòu)完全破壞，活動(dòng)消失，生化反應(yīng)停止，滲透交換等新陳代謝活動(dòng)消失，細(xì)胞死亡。

加熱滅菌可分干熱滅菌和濕熱滅菌兩大類。 1）干熱滅菌 利用灼燒或干熱空氣滅菌而沒(méi)有飽和水蒸氣參加的滅菌法稱為干熱滅菌法。

由于干熱滅菌使用方便，方法簡(jiǎn)單，故在生產(chǎn)上廣泛應(yīng)用。如火焰滅菌法：直接利用火焰把微生物燒死，故又稱焚燒滅菌法。

采用此法滅菌既徹底又迅速，但只適用于金屬制的接種工具、試管口及污染物品等的處理。熱空氣滅菌法：即在電熱恒溫干燥箱中利用干熱空氣來(lái)滅菌。

2）濕熱滅菌 即利用蒸汽進(jìn)行滅菌的方法。濕熱滅菌又分為高壓、常壓、間歇滅菌和巴氏滅菌4種。

①高壓蒸汽滅菌 由于高壓蒸汽具有較強(qiáng)的穿透力和較常壓高的溫度，能大大縮短滅菌時(shí)間，提高工作效率，加之蛋白質(zhì)在濕熱條件下容易變性，在熱蒸汽條件下，細(xì)菌的芽孢在120℃，經(jīng)20~30分鐘可全部被殺死。如滅菌材料體積較大，不易被穿透時(shí)，可將壓力增加到0.152兆帕，延長(zhǎng)至1~2小時(shí)。

在高壓蒸汽滅菌中，滅菌溫度隨蒸汽壓力的增加而升高（圖2-6）。 圖2-6 高壓蒸汽滅菌鍋 在使用高壓滅菌鍋時(shí)，要完全排出鍋內(nèi)的空氣而以飽和蒸汽代之。

如果空氣不排除干凈，則鍋內(nèi)溫度將低于同樣壓力下由純飽和蒸汽產(chǎn)生的溫度，影響滅菌效果。 此法適用于各種耐熱物品的滅菌，如一般培養(yǎng)基、生理鹽水等各種溶液、玻璃器皿、工作服等。

所采用的蒸汽壓力與時(shí)間，應(yīng)根據(jù)待滅菌物品的性質(zhì)、體積與容器類型等決定。 ②常壓蒸汽滅菌 這是采用自然壓力、100℃蒸汽進(jìn)行滅菌的方法。

它設(shè)備簡(jiǎn)單、成本低，當(dāng)前使用最廣泛。只要砌一個(gè)爐灶，買(mǎi)1~2只大鍋，上面用磚和水泥砌成，也可用大鐵桶、木桶等，體積大小可自行決定，但不宜過(guò)大，以裝800~1500瓶為好。

設(shè)計(jì)常壓灶時(shí)應(yīng)注意的問(wèn)題：大小根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模來(lái)定，灶頂部最好制成拱圓形，這樣冷凝水可沿灶的內(nèi)壁下流而不會(huì)打濕棉塞；灶倉(cāng)內(nèi)要有層架結(jié)構(gòu)，以便分層裝入滅菌物；灶上應(yīng)安裝溫度計(jì)，可隨時(shí)觀察灶內(nèi)溫度的變化；因滅菌時(shí)間長(zhǎng)，鍋內(nèi)水不夠蒸發(fā)，故容量大的灶要安裝加水裝置；灶倉(cāng)的密閉程度要盡可能高，這樣既提高滅菌效果，又節(jié)省燃料。菇農(nóng)在生產(chǎn)中還常用一種小型蒸汽發(fā)生裝置，引出蒸汽后直接通到下邊用木條塹起、四周用多層塑料布密封的菌袋堆中進(jìn)行常壓滅菌。

這種方法不用建灶，簡(jiǎn)便省工（圖2-7）。常壓滅菌一般水燒開(kāi)后保持8~10小時(shí)，悶一夜即可。

圖2-7 簡(jiǎn)易常壓滅菌法 ③常壓間歇蒸汽滅菌法 這是利用常壓蒸汽反復(fù)幾次滅菌的方法。具體做法是將待滅菌物品放在鍋內(nèi)，100℃處理1小時(shí)左右，殺死微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞，讓其冷卻至30℃左右，此時(shí)芽胞會(huì)萌發(fā)，再以同樣方法加熱處理，反復(fù)3次，可達(dá)到滅菌目的。

該方法可用于不耐高溫的藥品、營(yíng)養(yǎng)物、特殊培養(yǎng)基的滅菌。 ④低溫巴氏滅菌法 即在60~70℃下，經(jīng)一定時(shí)間，殺死有害微生物的方法。

適應(yīng)于不耐高溫的物品消毒。有些培養(yǎng)基，在高溫下遭到破壞，用此法既可殺死致病微生物的營(yíng)養(yǎng)體，又能使培養(yǎng)基的成分不致受到嚴(yán)重破壞。

食用菌生產(chǎn)中培養(yǎng)料堆積發(fā)酵工藝，就是利用這個(gè)原理殺死其中的病蟲(chóng)、雜菌。 （2）過(guò)濾除菌法 又分液體過(guò)濾和空氣過(guò)濾兩種，就是采用機(jī)械的方法，設(shè)計(jì)一種濾孔比細(xì)菌還小的篩子，做成各種過(guò)濾器，通過(guò)機(jī)械過(guò)濾，只讓液體培養(yǎng)基或空氣從篩孔流出，各種微生物菌體則留在篩子上，從而達(dá)到除菌的目的。

這種方法適用于對(duì)熱不穩(wěn)定的體積小的液體培養(yǎng)基（如動(dòng)物血清、蛋白質(zhì)、酶、維生素等）及氣體的滅菌。超凈工作臺(tái)的工作原理就是將帶菌空氣通過(guò)過(guò)濾滅菌形成無(wú)菌空氣，從風(fēng)洞中吹出，來(lái)造成工作臺(tái)范圍的無(wú)菌狀態(tài)。

過(guò)濾滅菌的最大優(yōu)點(diǎn)是不破壞培養(yǎng)基中各種物質(zhì)的化學(xué)成分。常用的過(guò)濾器有用硅藻土制的、石棉制的、陶瓷土制的，也有用火棉膠、硝化纖維素濾膜制成的。

（3）輻射滅菌法 利用輻射產(chǎn)生的能量進(jìn)行殺菌的方法稱輻射滅菌。輻射可分電離輻射和非電離輻射兩種，α-射線、β-射線、γ-射線、X-射線、中子和質(zhì)子、微波等屬電離輻射，紫外線、臭氧、日光為非電離輻射。

1）紫外線滅菌 紫外線殺菌的原理是利用紫外線的輻射作用。用燈管直接照射細(xì)菌使其發(fā)生光化學(xué)反應(yīng)，將細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)誘導(dǎo)形成胸腺嘧啶雙聚體，從而抑制DNA的復(fù)制而發(fā)生變性、致死。

另一方面，空氣在紫外線照射下產(chǎn)生的臭氧（O3），也具有一定的殺菌作用。紫外線的有效作用距離為1.2~2.0米。

紫外燈一般懸吊在接種室或培養(yǎng)室的上方，個(gè)數(shù)依房間大小而定，容1~2個(gè)人操作的接種室，安裝一個(gè)30瓦的紫外燈就可以了。在每次接種前，應(yīng)將所需的器具一起放入接種室（箱）內(nèi)，然后打開(kāi)紫外燈照射。

如果接種室體積較大，開(kāi)燈照射2小時(shí)。