薄層(薄層色譜基本操作有哪幾個(gè)關(guān)鍵技術(shù)各項(xiàng)操作應(yīng)該注意什么)

1.薄層色譜基本操作有哪幾個(gè)關(guān)鍵技術(shù) 各項(xiàng)操作應(yīng)該注意什么

薄層色譜（Thin Layer Chromatography）常用TLC表示，又稱薄層層析，屬于固-液吸附色譜。是近年來發(fā)展起來的一種微量、快速而簡(jiǎn)單的色譜法，它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)。一方面適用于小量樣品（幾到幾十微克，甚至0.01μg）的分離；另一方面若在制作薄層板時(shí)，把吸附層加厚，將樣品點(diǎn)成一條線，則可分離多達(dá)500mg的樣品。因此又可用來精制樣品。故此法特別適用于揮發(fā)性較小或在較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物資。此外，在進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)時(shí)，常利用薄層色譜觀察原料斑點(diǎn)的逐步消失來判斷反應(yīng)是否完成。

薄層色譜是在被洗滌干凈的玻板（10*3cm左右）上均勻的涂一層吸附劑或支持劑，帶干燥、活化后將樣品溶液用管口平整的毛細(xì)管滴加于離薄層板一端約1cm處的起點(diǎn)線上，涼干或吹干后置薄層板于盛有展開劑的展開槽內(nèi)，浸入深度為0.5cm。待展開劑前沿離頂端約1cm附近時(shí)，將色譜板取出，干燥后噴以顯色劑，或在紫外燈下顯色。

注意事項(xiàng)：

1鋪制薄層板：鋪板用的勻漿不宜過稠或過?。哼^稠，板容易出現(xiàn)拖動(dòng)或停頓造成的層紋；過稀，水蒸發(fā)后，板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠G：水=1:2~3，硅膠G：羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。研磨勻漿的時(shí)間，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來定，與空氣濕度有關(guān)，一般通過拿起研棒時(shí)勻漿下滴的情況來判斷，越稠越難下滴。勻漿的稀稠除影響板的平滑外，也影響板涂層的厚度，進(jìn)一步影響上樣量。涂層薄，點(diǎn)樣易過載；涂層厚，顯色不那么明顯。通常，板的質(zhì)量對(duì)薄層鑒別的影響不是很大，影響最大的是展開劑的配制和展開系統(tǒng)的飽和。 2點(diǎn)樣：盡量用小的點(diǎn)樣管。如果有足夠的耐性，最好只用1微升的點(diǎn)樣管。這樣，點(diǎn)的斑點(diǎn)較小，展開的色譜圖分離度好，顏色分明。樣品溶液的含水量越小越好，樣品溶液含水量大，點(diǎn)樣斑點(diǎn)擴(kuò)散大。樣品溶液的溶劑一般是無水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。點(diǎn)好樣的薄層板用電吹風(fēng)的熱風(fēng)吹干或放入干燥器里晾干。 薄層色譜用于定量時(shí)，點(diǎn)樣是最主要的誤差來源。 供試液的溶劑均有不同程度的洗脫力，所以在點(diǎn)樣的同時(shí)，樣品在原點(diǎn)就可是成環(huán)形展開，原點(diǎn)直徑的擴(kuò)散促進(jìn)了這種展開，Kaiser稱之為“上樣環(huán)形色譜效應(yīng)”。如果樣品在溶劑中的溶解度很大，原點(diǎn)將變成空心環(huán)。這種效應(yīng)對(duì)隨后的先行展開造成很不利的影響。 供試液的溶劑在原點(diǎn)的殘留，也會(huì)改變展開的選擇性，特別是供試液的溶劑與展開劑的極性相差較大時(shí)更明顯。再者，親水性溶劑殘留在原點(diǎn)吸收大氣中的水分（特別在高濕度環(huán)境）對(duì)色譜的影響也不可低估。因此點(diǎn)樣時(shí)的同步干燥或繼后干燥以除去原點(diǎn)殘存的溶劑是需要的。但應(yīng)盡可能避免高溫加熱，如用吹風(fēng)筒加熱，樣品變?yōu)楣虘B(tài)后，部分或全部強(qiáng)烈的吸附在吸附劑的顆粒上，而促進(jìn)了硅膠的有催化作用的活性表面故態(tài)化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致樣品的變性（尤其熱不穩(wěn)定物質(zhì)），至少移動(dòng)相在展開時(shí)對(duì)這部分樣品的溶解速度比移動(dòng)速度慢得多而形成拖尾（斑點(diǎn)拖尾的原因之一）。

3 展開劑配制 選擇合適的量器把各組成溶劑移入分液漏斗，強(qiáng)烈振搖使混合液充分混勻，放置，如果分層，取用體積大的一層作為展開劑。絕對(duì)不應(yīng)該把各組成溶液倒入展開缸，振搖展開缸來配制展開劑。混合不均勻和沒有分液的展開劑，會(huì)造成層析的完全失敗。各組成溶劑的比例準(zhǔn)確度對(duì)不同的分析任務(wù)有不同的要求，盡量達(dá)到實(shí)驗(yàn)室儀器的最高精確度，比如：取1ml的溶劑，應(yīng)使用1ml的單標(biāo)移液管，移液管應(yīng)符合計(jì)量認(rèn)證要求，盡管多數(shù)時(shí)候這不是必須的。 4 展開系統(tǒng)的飽和 一般使用的是雙槽的展開缸，一槽用來放展開劑，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展開的板放入兩槽間的平臺(tái)，斜架著，蓋上展開缸的蓋子。讓展開劑的蒸氣充滿展開缸，并使薄層板吸附蒸氣達(dá)到飽和，防止邊沿效應(yīng)，飽和時(shí)間在半個(gè)小時(shí)左右。展開時(shí)難免要打開蓋子把薄層板放入展開劑中，不過對(duì)薄層板與蒸氣的吸附平衡影響不大，當(dāng)然動(dòng)作應(yīng)該盡量輕、快。 5 溫濕度的控制 溫濕度對(duì)薄層影響都很大。不凍結(jié)的前提下，通常溫度越低分離越好，較難的分離需在低溫下分離，例如人參皂苷。濕度的影響，估計(jì)主要是影響薄層板的吸附能力，導(dǎo)致選擇性（容量因子）的變化，濕度應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況確定。溫度控制使用空調(diào)器或冰柜，濕度控制是通過在另一展開槽放置相應(yīng)濃度的硫酸。 6 TLC通用顯色方法 通用顯色方法主要有： 1、紫外照射法：方便、不破壞樣品； 2、碘蒸氣法：通用性強(qiáng)，與紫外法結(jié)合靈敏度高于該兩法單獨(dú)使用； 3、熒光試劑：制造熒光背景，使原來紫外下無熒光物質(zhì)被鑒別，有熒光物質(zhì)更明顯； 4、硫酸溶劑：對(duì)絕大多數(shù)有機(jī)物有效，但有破壞性。

2.薄層色譜法的基本原理

薄層色譜法是一種吸附薄層色譜分離法，它利用各成分對(duì)同一吸附劑吸附能力不同，使在流動(dòng)相（溶劑）流過固定相（吸附劑）的過程中，連續(xù)的產(chǎn)生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，從而達(dá)到各成分的互相分離的目的。

薄層層析可根據(jù)作為固定相的支持物不同，分為薄層吸附層析（吸附劑）、薄層分配層析（纖維素）、薄層離子交換層析（離子交換劑）、薄層凝膠層析（分子篩凝膠）等。一般實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用較多的是以吸附劑為固定相的薄層吸附層析。

吸附是表面的一個(gè)重要性質(zhì)。任何兩個(gè)相都可以形成表面，吸附就是其中一個(gè)相的物質(zhì)或溶解于其中的溶質(zhì)在此表面上的密集現(xiàn)象。在固體與氣體之間、固體與液體之間、吸附液體與氣體之間的表面上，都可能發(fā)生吸附現(xiàn)象。

物質(zhì)分子之所以能在固體表面停留，這是因?yàn)楣腆w表面的分子（離子或原子）和固體內(nèi)部分子所受的吸引力不相等。在固體內(nèi)部，分子之間相互作用的力是對(duì)稱的，其力場(chǎng)互相抵消。而處于固體表面的分子所受的力是不對(duì)稱的，向內(nèi)的一面受到固體內(nèi)部分子的作用力大，而表面層所受的作用力小，因而氣體或溶質(zhì)分子在運(yùn)動(dòng)中遇到固體表面時(shí)受到這種剩余力的影響，就會(huì)被吸引而停留下來。吸附過程是可逆的，被吸附物在一定條件下可以解吸出來。在單位時(shí)間內(nèi)被吸附于吸附劑的某一表面積上的分子和同一單位時(shí)間內(nèi)離開此表面的分子之間可以建立動(dòng)態(tài)平衡，稱為吸附平衡。吸附層析過程就是不斷地產(chǎn)生平衡與不平衡、吸附與解吸的動(dòng)態(tài)平衡過程。

例如用硅膠和氧化鋁作支持劑，其主要原理是吸附力與分配系數(shù)的不同，使混合物得以分離。當(dāng)溶劑沿著吸附劑移動(dòng)時(shí)，帶著樣品中的各組分一起移動(dòng)，同時(shí)發(fā)生連續(xù)吸附與解吸作用以及反復(fù)分配作用。由于各組分在溶劑中的溶解度不同，以及吸附劑對(duì)它們的吸附能力的差異，最終將混合物分離成一系列斑點(diǎn)。如作為標(biāo)準(zhǔn)的化合物在層析薄板上一起展開，則可以根據(jù)這些已知化合物的Rf值（后面介紹Rf值）對(duì)各斑點(diǎn)的組分進(jìn)行鑒定，同時(shí)也可以進(jìn)一步采用某些方法加以定量。

3.薄層層析法具體操作注意事項(xiàng)是什么

鋪板用的勻漿不宜過稠或過?。哼^稠，板容易出現(xiàn)拖動(dòng)或停頓造成的層紋；過稀，水蒸發(fā)后，板表面較粗糙。

勻漿配比一般是硅膠G：水=1:2~3，硅膠G：羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。研磨勻漿的時(shí)間，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來定，與空氣濕度有關(guān)，一般通過拿起研棒時(shí)勻漿下滴的情況來判斷，越稠越難下滴。

勻漿的稀稠除影響板的平滑外，也影響板涂層的厚度，進(jìn)一步影響上樣量。涂層薄，點(diǎn)樣易過載；涂層厚，顯色不那么明顯。

通常，板的質(zhì)量對(duì)薄層鑒別的影響不是很大，影響最大的是展開劑的配制和展開系統(tǒng)的飽和。 點(diǎn)樣 盡量用小的點(diǎn)樣管。

如果有足夠的耐性，最好只用1微升的點(diǎn)樣管。 這樣，點(diǎn)的斑點(diǎn)較小，展開的色譜圖分離度好，顏色分明。

樣品溶液的含水量越小越好，樣品溶液含水量大，點(diǎn)樣斑點(diǎn)擴(kuò)散大。樣品溶液的溶劑一般是無水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。

點(diǎn)好樣的薄層板用電吹風(fēng)的熱風(fēng)吹干或放入干燥器里晾干。 展開劑配制 選擇合適的量器把各組成溶劑移入分液漏斗，強(qiáng)烈振搖使混合液充分混勻，放置，如果分層，取用體積大的一層作為展開劑。

絕對(duì)不應(yīng)該把各組成溶液倒入展開缸，振搖展開缸來配制展開劑?；旌喜痪鶆蚝蜎]有分液的展開劑，會(huì)造成層析的完全失敗。

各組成溶劑的比例準(zhǔn)確度對(duì)不同的分析任務(wù)有不同的要求，盡量達(dá)到實(shí)驗(yàn)室儀器的最高精確度，比如：取1ml的溶劑，應(yīng)使用1ml的單標(biāo)移液管，移液管應(yīng)符合計(jì)量認(rèn)證要求，盡管多數(shù)時(shí)候這不是必須的。 展開系統(tǒng)的飽和 一般使用的是雙槽的展開缸，一槽用來放展開劑，另一槽可加入氨水或硫酸。

把待展開的板放入兩槽間的平臺(tái)，斜架著，蓋上展開缸的蓋子。讓展開劑的蒸氣充滿展開缸，并使薄層板吸附蒸氣達(dá)到飽和，防止邊沿效應(yīng)，飽和時(shí)間在半個(gè)小時(shí)左右。

展開時(shí)難免要打開蓋子把薄層板放入展開劑中，不過對(duì)薄層板與蒸氣的吸附平衡影響不大，當(dāng)然動(dòng)作應(yīng)該盡量輕、快。 溫濕度的控制 溫濕度對(duì)薄層影響都很大。

不凍結(jié)的前提下，通常溫度越低分離越好，較難的分離需在低溫下分離，例如人參皂苷。濕度的影響，估計(jì)主要是影響薄層板的吸附能力，導(dǎo)致選擇性（容量因子）的變化，濕度應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況確定。

溫度控制使用空調(diào)器或冰柜，濕度控制是通過在另一展開槽放置相應(yīng)濃度的硫酸。 顯色 噴顯色劑顯色最重要是有好的霧化器。

4.薄層層析法的原理是什么

薄層層析（TLC） 1 【含義】薄層層析是將吸附劑或者支持劑（有時(shí)加入固化劑）均勻地鋪在一塊玻璃上，形成薄層。

把欲分離的樣品點(diǎn)在薄層上，然后用適宜的溶劑展開，使混合物得以分離的方法。由于層析在薄層上進(jìn)行故而得名。

2 【應(yīng)用】薄層層析是一種微量、快速的層析方法。 它不僅可以用于純物質(zhì)的鑒定，也可用于混合物的分離、提純及含量的測(cè)定。

還可以通過薄層層析來摸索和確定柱層析時(shí)的洗脫條件。 3 【分類】根據(jù)分離的原理不同，薄層層析可以分為兩類：用吸附劑鋪成的薄層所進(jìn)行的層析為吸附薄層層析；用纖維素粉、硅膠、硅藻土為支持劑鋪成的薄層，屬于分配薄層層析。

薄層層析中以吸附薄層為多用，吸附薄層中常用的吸附劑為氧化鋁和硅膠。 4 【原理1】吸附薄層主要是利用吸附劑對(duì)樣品中各成分吸附能力不同，及展開劑對(duì)它們的解吸附能力的不同，使各成分達(dá)到分離。

吸附作用主要由于物體表面作用力、氫鍵、絡(luò)合、靜電引力、范德華力等產(chǎn)生。 吸附強(qiáng)度決定于吸附劑的吸附能力，還受被吸附成分的性質(zhì)影響，更與展開劑的性質(zhì)有關(guān)。

5【原理2】分配薄層層析的原理是，用極性溶劑吸苷在固體支持劑上所形成的混合物，鋪成薄層（或裝柱），然后活化、點(diǎn)樣（或上樣），再用極性較弱的展開劑（或洗脫劑）進(jìn)行展開。 在展開過程中，各成分在固定相和流動(dòng)相之間作連續(xù)不斷的分配。

由于各成分在兩相間的分配系數(shù)不同，因而可以達(dá)到相互分離的目的。 6【圖例】層析硅膠 。

5.什么是薄層色譜法

薄層色譜法，系將供試品溶液點(diǎn)樣于薄層板上，經(jīng)展開、檢視后所得的色譜圖，與適宜的對(duì)照物按同法所得的色譜對(duì)比，用于藥品的鑒別或雜質(zhì)檢查的方法。

1。儀器與材料 （1）薄層板 自制薄層板玻板要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。

最常用的固定相有硅膠G、硅膠GF254、硅膠H和硅膠HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、微晶纖維素F254等。 其顆粒大小，一般要求直徑為5~40μm。

薄層涂布，一般可分為無黏合劑和含黏合劑兩種；前者系將固定相直接涂布于玻板上，后者系在固定相中加入一定量的黏合劑，一般常用10%~15%煅石膏（CaSO4·2H2O在140℃加熱4小時(shí)），混勻后加水適量使用，或用羧甲基纖維素鈉水溶液（0。 2%~0。

5%）適量調(diào)成糊狀，均勻涂布于玻板上。使用涂布器涂布應(yīng)能使固定相在玻板上涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。

市售薄層板分普通薄層板和高效薄層板，如硅膠薄層板、硅膠GF254薄層板、聚酰胺薄膜和鋁基片薄層板等。 （2）點(diǎn)樣器同紙色譜法項(xiàng)下。

（3）展開容器應(yīng)使用適合薄層板大小的玻璃制薄層色譜展開缸，并有嚴(yán)密的蓋子，底部應(yīng)平整光滑，或有雙槽。 （4）顯色劑見各品種項(xiàng)下規(guī)定。

可采用噴霧顯色、浸漬顯色或置碘蒸氣中顯色，檢出斑點(diǎn)。 （5）顯色裝置噴霧顯色要求用壓縮氣體使顯色劑呈均勻細(xì)霧狀噴出；浸漬顯色可用專用玻璃器械或用適宜的玻璃缸代用；蒸氣熏蒸顯色可用雙槽玻璃缸或適宜大小的干燥器代替。

（6）檢視裝置為裝有可見光、短波紫外光（254nm）、長波紫外光（365nm）光源及相應(yīng)濾片的暗箱，可附加攝像設(shè)備供拍攝圖像用，暗箱內(nèi)光源應(yīng)有足夠的光照度。 2。

操作方法 （1）薄層板制備 自制薄層板除另有規(guī)定外，將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0。 2~0。

3mm），取下涂好薄層的玻板，置水平臺(tái)上于室溫下晾干后，在110℃活化30分鐘，即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度（可通過透射光和反射光檢視）。

市售薄層板臨用前一般應(yīng)在110℃活化30分鐘。聚酰胺薄膜不需活化。

鋁基片薄層板可根據(jù)需要剪裁，但須注意剪裁后的薄層板底邊的硅膠層不得有破損。 如在貯放期間被空氣中雜質(zhì)污染，使用前可用適宜的溶劑在展開容器中上行展開預(yù)洗，110℃活化后，放干燥器中備用。

（2）點(diǎn)樣除另有規(guī)定外，用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣于薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊2。0cm，樣點(diǎn)直徑為2~4mm，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜，一般為1。

0~2。0cm。

點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層板表面。 （3）展開展開缸如需預(yù)先用展開劑飽和，可在缸中加入足夠量的展開劑，并在壁上貼兩條與缸一樣高、寬的濾紙條，一端浸入展開劑中，密封頂蓋，使系統(tǒng)平衡或按各品種正文規(guī)定操作。

[醫(yī)學(xué)教育 網(wǎng)搜集整理 ] 將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0。 5~1。

0cm（切勿將樣點(diǎn)浸入展開劑中），密封頂蓋，待展開至規(guī)定距離（一般為10~15cm），取出薄層板，晾干，按各品種項(xiàng)下的規(guī)定檢測(cè)。 展開可以向一個(gè)方向進(jìn)行，即單向展開；也可以進(jìn)行雙向展開，即先向一個(gè)方向展開，取出，待展開劑完全揮發(fā)后，將薄層板轉(zhuǎn)動(dòng)90°，再用原展開劑或另一種展開劑進(jìn)行展開；亦可多次展開。

（4）顯色與檢視熒光薄層板可用熒光猝滅法；普通薄層板，如有色物質(zhì)可直接檢視；無色物質(zhì)可用物理或化學(xué)方法檢視。物理方法是檢出斑點(diǎn)的熒光顏色及強(qiáng)度；化學(xué)方法一般用化學(xué)試劑顯色后，立即覆蓋同樣大小的玻板，檢視。

3。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)來源： 按各品種項(xiàng)下要求對(duì)檢測(cè)方法進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，檢測(cè)斑點(diǎn)的檢測(cè)靈敏度、比移值（Rf）和分離效能應(yīng)符合規(guī)定。

（1）檢測(cè)靈敏度系指雜質(zhì)檢查時(shí)，采用對(duì)照溶液稀釋若干倍的溶液與供試品溶液和對(duì)照溶液在規(guī)定的色譜條件下，在同一塊薄層板上點(diǎn)樣、展開、檢視，前者應(yīng)顯示清晰的斑點(diǎn)。 （2）比移值（Rf）系指從基線至展開斑點(diǎn)中心的距離與從基線至展開劑前沿的距離的比率。

可用計(jì)算供試品溶液主斑點(diǎn)與對(duì)照品溶液主斑點(diǎn)的比移值進(jìn)行比較，或用比移值來說明主斑點(diǎn)或雜質(zhì)斑點(diǎn)的位置。 （3）分離效能鑒別時(shí)，對(duì)照品與結(jié)構(gòu)相似的藥物對(duì)照品制成的混合對(duì)照溶液應(yīng)顯示兩個(gè)清晰分離的斑點(diǎn)。

雜質(zhì)檢查時(shí)，雜質(zhì)對(duì)照品用供試品自身稀釋對(duì)照溶液或同品種對(duì)照品溶液溶解制成的混合對(duì)照溶液應(yīng)顯示兩個(gè)清晰分離的斑點(diǎn)，或待測(cè)成分與相鄰的雜質(zhì)斑點(diǎn)應(yīng)清晰分離。 4.測(cè)定法來源：考試大 （1）鑒別可采用與同濃度的對(duì)照品溶液，在同一塊薄層板上點(diǎn)樣、展開與檢視，供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的顏色（或熒光）與位置（Rf）應(yīng)與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)一致，而且主斑點(diǎn)的大小與顏色的深淺也應(yīng)大致相同。

或采用供試品溶液與對(duì)照品溶液等體積混合，醫(yī)學(xué) 教育 網(wǎng)搜集整理 應(yīng)顯示單一、緊密的斑點(diǎn)；或選用與供試品化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的藥物對(duì)照品與供試品溶液的主斑點(diǎn)比較，兩者Rf應(yīng)不同；或?qū)⑸鲜鰞煞N溶液等體積混合，應(yīng)顯示兩個(gè)清晰分離的斑點(diǎn)。 （2）雜質(zhì)檢查可采用雜質(zhì)對(duì)照品法、供試。

6.薄層色譜法是什么

薄層色譜法，系將適宜的吸附劑或載體涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層。

待點(diǎn)樣、展開后，與適宜的對(duì)照物按同法在同板上所得的色譜圖對(duì)比，并可用薄層掃描儀進(jìn)行掃描，用以進(jìn)行藥品的鑒別，雜質(zhì)檢查或含量測(cè)定的方法。 1。

儀器與材料 （1） 玻板 除另有規(guī)定外，用10cm*10cm,10cm*15cm,20cm*10cm或20cm*20cm的規(guī)格，要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。 （2） 吸附劑或載體 最常用的有硅膠G、硅膠GF、硅膠H、硅膠HF，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、微晶纖維素F等。

其顆粒大小一般要求直徑為10~40μm。薄層涂布，除另有規(guī)定外，一般可分無粘合劑和含粘合劑兩種；前者系將吸附劑或載體直接涂布于玻璃板上，后者系在吸附劑或載體中加入一定量的粘合劑，一般常用10%~15%煅石膏（CaSO4·2H2O在 140℃烘4小時(shí)），混勻后加水適量使用，或用羧甲基纖維素鈉水溶液（0。

2%~0。5%）適量調(diào)成糊狀，均勻涂布于玻璃板上。

也有含一定改性劑如熒光劑或緩沖液等的薄層。 （3） 涂布器 應(yīng)能使吸附劑或載體在玻璃板上手工或自動(dòng)涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。

（4） 點(diǎn)樣器 一般采用微升毛細(xì)管或與之相應(yīng)的點(diǎn)樣器材。 （5）展開室 可用適合薄層板大小的專用玻璃缸，底部平底或有雙槽，蓋子須密閉。

2。操作方法 （1） 薄層板制備 除另有規(guī)定外，將吸附劑1份和水3份在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為 0。

25~0。5mm），取下涂好薄層的玻板，于室溫下，置水平臺(tái)上晾干，在反射光及透射光下檢視，表面應(yīng)均勻，平整，無麻點(diǎn)、無氣泡、無破損及污染，于 110℃烘30分鐘，冷卻后立即使用或置干燥箱中備用。

或用商品預(yù)制板。 （2） 點(diǎn)樣 除另有規(guī)定外，用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣于薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊1。

0~1。5cm，樣點(diǎn)直徑一般不大于3mm，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜。

點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。 （3） 展開 將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，浸入展開劑的深度為距原點(diǎn)5mm為宜，密封，待展開至規(guī)定距離，除另有規(guī)定外，一般為8~15cm，取出薄層板，晾干，按正文項(xiàng)下的規(guī)定檢測(cè)。

展開缸如需預(yù)先用展開劑預(yù)平衡，可在缸中加入適量的展開劑，必要時(shí)并在壁上貼二條與缸一樣高、寬的濾紙條，一端浸入展開劑中，蓋嚴(yán)，使展開缸平衡或按正文規(guī)定操作。 （4） 如需用薄層掃描儀對(duì)色譜進(jìn)行掃描供鑒別、檢查或定量，則可用薄層掃描法。

3。 薄層掃描法 系指用一定波長的光照射在薄層板上，對(duì)薄層色譜有吸收紫外光或可見光的斑點(diǎn)，或經(jīng)激發(fā)后能發(fā)射出熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，將掃描得到的圖譜及積分?jǐn)?shù)據(jù)用于藥品的鑒別，雜質(zhì)檢查或含量測(cè)定。

除另有規(guī)定外，薄層掃描方法可根據(jù)各種薄層掃描儀的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及使用說明，結(jié)合具體情況，選擇反射方式，采用吸收法，或熒光法，用雙波長或單波長掃描。 測(cè)定方法有內(nèi)標(biāo)法及外標(biāo)法，由于影響薄層掃描結(jié)果的因素很多，故薄層掃描定量測(cè)定應(yīng)在保證供試品斑點(diǎn)的量在校正曲線的線性范圍內(nèi)的情況下，與對(duì)照品同板點(diǎn)樣，展開，掃描，測(cè)量和計(jì)算。

用外標(biāo)法測(cè)定時(shí)，若對(duì)照品各數(shù)據(jù)點(diǎn)在校正曲線上呈一通過原點(diǎn)的直線時(shí)，可用一點(diǎn)法校正，如不通過原點(diǎn)通常宜采用二點(diǎn)法校正，必要時(shí)用多點(diǎn)法校正。 含量測(cè)定時(shí)，供試品溶液和對(duì)照品溶液應(yīng)交叉點(diǎn)于同一薄層板上，供試品點(diǎn)樣不得少于4個(gè)，對(duì)照品每一濃度不得少于2個(gè)，薄層掃描定量用的對(duì)照品純度應(yīng)符合含量測(cè)定用對(duì)照品的要求。

7.薄層色譜的原理是什么

物質(zhì)分子之所以能在固體表面停留，這是因?yàn)楣腆w表面的分子（離子或原子）和固體內(nèi)部分子所受的吸引力不相等。

在固體內(nèi)部，分子之間相互作用的力是對(duì)稱的，其力場(chǎng)互相抵消。而處于固體表面的分子所受的力是不對(duì)稱的，向內(nèi)的一面受到固體內(nèi)部分子的作用力大，而表面層所受的作用力小，因而氣體或溶質(zhì)分子在運(yùn)動(dòng)中遇到固體表面時(shí)受到這種剩余力的影響，就會(huì)被吸引而停留下來。

吸附過程是可逆的，被吸附物在一定條件下可以解吸出來。在單位時(shí)間內(nèi)被吸附于吸附劑的某一表面積上的分子和同一單位時(shí)間內(nèi)離開此表面的分子之間可以建立動(dòng)態(tài)平衡，稱為吸附平衡。

吸附層析過程就是不斷地產(chǎn)生平衡與不平衡、吸附與解吸的動(dòng)態(tài)平衡過程。