數(shù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)(觀察植物細(xì)胞時(shí)顯微鏡使用注意事項(xiàng))
1.觀察植物細(xì)胞時(shí)顯微鏡使用注意事項(xiàng)
1.右手握住鏡臂，左手托住鏡座。
2.把顯微鏡放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，略偏左（顯微鏡放在距實(shí)驗(yàn)臺(tái)邊緣7厘米左右處）。安裝好目鏡和物鏡。
二、對(duì)光 3.轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，使低倍物鏡對(duì)準(zhǔn)通光孔（物鏡的前端與載物臺(tái)要保持2厘 米的距離）。 4.把一個(gè)較大的光圈對(duì)準(zhǔn)通光孔。
左眼注視目鏡內(nèi)（右眼睜開，同時(shí)畫圖）。轉(zhuǎn)動(dòng)反光鏡，使光線通過(guò)通光孔反射到鏡筒內(nèi)。
通過(guò)目鏡，可以看到白亮的視野。 三、觀察 5.把所要觀察的玻片標(biāo)本（也可以用印有“6”字的薄紙片制成）放在載物臺(tái)上，用壓片夾壓住，標(biāo)本要正對(duì)通光孔的中心。
6.轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋，使鏡筒緩緩下降，直到物鏡接近玻片標(biāo)本為止（眼睛看著物鏡，以免物鏡碰到玻片標(biāo)本）。 7.左眼向目鏡內(nèi)看，同時(shí)反方向轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋，使鏡筒緩緩上升，直到看清物像為止。
再略微轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，使看到的物像更加清晰。 注意事項(xiàng)：實(shí)驗(yàn)完畢，把顯微鏡的外表擦拭干凈。
轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，把兩個(gè)物鏡偏到兩旁，并將鏡筒緩緩下降到最低處。最后把顯微鏡放進(jìn)鏡箱里，送回原處。
其實(shí)書上挺詳細(xì)的，看看書吧，也許對(duì)你會(huì)有幫助。
2.Transwell細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)
2. 1
NIH3T3 細(xì)胞制備的趨化因子與胎牛血清 趨化因子是能使細(xì)胞產(chǎn)生趨化運(yùn)動(dòng)的一類細(xì)胞因子[2 ] 。目前利用NIH3T3 細(xì)胞制備趨化因子做細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室比較多，時(shí)間較長(zhǎng)且實(shí)驗(yàn)步驟繁瑣。眾所周知，胎牛血清中有趨化因子，我們?cè)诓煌瑵舛萒NFα刺激下的HCCC29810 膽囊癌細(xì)胞體外侵襲能力的強(qiáng)弱實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)用胎牛血清和用NIH3T3 細(xì)胞制備的趨化因子做細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)效果是一樣的，兩組遷移的細(xì)胞數(shù)很接近。在實(shí)驗(yàn)時(shí)間上，用NIH3 T3細(xì)胞制備趨化因子做細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)周期為1 周，而用胎牛血清作趨化因子做細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)周期為2 d ，實(shí)驗(yàn)時(shí)間節(jié)省了很多。因此認(rèn)為可以用胎牛血清來(lái)代替NIH3T3 細(xì)胞制備的趨化因子。
2. 2 細(xì)胞的準(zhǔn)備 所需細(xì)胞應(yīng)處在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，細(xì)胞活力需大于95 %。如果細(xì)胞活力小，就會(huì)造成細(xì)胞穿透能力下降，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
2. 3 擦去Matrigel 凝膠和聚碳酯膜上表面的細(xì)胞 先用干棉簽將上室內(nèi)液體吸去，再用蒸餾水浸濕的棉簽輕輕擦去Mat rigel 凝膠和聚碳酯膜上表面的細(xì)胞，如果沒有擦凈聚碳酯膜上表面的細(xì)胞，在細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)就會(huì)將沒擦掉的細(xì)胞也計(jì)進(jìn)來(lái)。尤其是細(xì)胞為圓形的時(shí)候，就會(huì)分辨不出是穿過(guò)去的細(xì)胞還是沒穿過(guò)去的細(xì)胞，對(duì)于長(zhǎng)梭形細(xì)胞來(lái)說(shuō)，穿過(guò)去的細(xì)胞為長(zhǎng)梭形，沒穿過(guò)去的細(xì)胞多為圓形。
2. 4 蘇木素染色 上室浸泡在新蘇木素中的時(shí)間為1 min ，用過(guò)多次的蘇木素為2 min。在研究粉防己堿對(duì)HUVEC 人類臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞遷移能力的抑制作用沒有將多余蘇木素洗去，直接脫水、透明，造成細(xì)胞圖片背景模糊，細(xì)胞不清楚。在作不同濃度TNFα刺激下的HCCC29810 膽囊癌細(xì)胞體外侵襲能力的強(qiáng)弱實(shí)驗(yàn)時(shí)我們將其置于盛有自來(lái)水的燒杯中，反復(fù)漂洗幾次，將多余蘇木素洗去再行脫水、透明；這樣做出的細(xì)胞圖片背景干凈，細(xì)胞清楚。
2. 5 脫水和透明時(shí)間 脫水時(shí)間各為1 min ，在二甲苯中的時(shí)間不要過(guò)長(zhǎng)，以2 min~3 min 為宜；尤其是同時(shí)操作多個(gè)樣本時(shí)，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)就會(huì)造成部分聚碳酯膜從上室基底部自動(dòng)脫落下來(lái)，上室間粘連在一起，造成樣本混淆，實(shí)驗(yàn)失敗。建議在最后一步實(shí)驗(yàn)時(shí)需二人協(xié)做，一人辨別并取出樣本，一人小心將聚碳酯膜自上室基底切取下來(lái)，置載玻片上中性樹脂封片并及時(shí)編號(hào)。
2. 6 細(xì)胞計(jì)數(shù) 當(dāng)實(shí)驗(yàn)用的細(xì)胞為圓形時(shí)，實(shí)驗(yàn)人員容易將聚碳酯膜上小孔誤認(rèn)為細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。我們?cè)谧鱒EGF 對(duì)人結(jié)腸癌HT229 細(xì)胞體外侵襲能力的影響時(shí)，發(fā)現(xiàn)HT229細(xì)胞很小，很容易將聚碳酯膜上小孔誤認(rèn)為細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù) 。
