簡述外植物滅菌方法及(植物組織培養(yǎng)中滅菌的方法主要有哪些)
1.植物組織培養(yǎng)中 滅菌的方法主要有哪些
1.濕熱滅菌法 通過加壓提高蒸汽溫度，用高壓蒸汽滅菌，穿透力強(qiáng)，溫度高，滅菌效果最好。
注意事項：1.完全排除高壓滅菌器內(nèi)的冷空氣。有冷空氣存在時，在同一表壓下所達(dá)到的溫度值要低，而冷空氣排出越少，溫度就低得越多。
在高壓蒸汽滅菌時，為保證達(dá)到規(guī)定的溫度，必須將冷空氣完全排除。否則，雖然壓力達(dá)到，而溫度達(dá)不到規(guī)定的要求，滅菌就不徹底。
2.紫外線 殺菌譜廣，但穿透力弱，影響因素多，殺菌效能受到一定限制。 紫外線消毒效果與紫外線強(qiáng)度、照射時間、溫度與濕度等因素有關(guān)。
我國規(guī)定紫外燈照射強(qiáng)度距離1m處不低于70μw/cm2。一般紫外燈使用超過100h，則應(yīng)更換。
表面有塵土，降低滅菌效果。紫外燈殺菌的溫度以20~40℃，相對濕度40%~60%為宜。
3干熱滅菌法。灼燒與火焰滅菌：灼燒主要是用于工具滅菌，在火焰上灼燒即可達(dá)到徹底滅菌，火焰滅菌通常用于無菌操作中，將試管口、玻璃瓶口、硅氟塑料塞等反復(fù)通過火焰數(shù)次，利用火焰對管口等進(jìn)行滅菌，阻止管口污染，作為無菌操作過程中的輔助滅菌手段。
4干烤滅菌：利用熱輻射及干熱空氣進(jìn)行滅菌。一般將待檢滅菌的物品如金屬、玻璃、陶瓷制品包裝后，均可在烤箱內(nèi)干熱滅菌。
通常加熱至160℃，保溫2h可完全滅菌。但不宜超過170℃，玻璃量具易變形。
降溫過速，驟冷易引起玻璃器皿炸裂。干熱滅菌時裝入干烤箱內(nèi)的物品切勿緊密，應(yīng)有空隙，利于熱空氣流動，過密，致使溫度不均，部分物品滅菌不徹底。
2.滅菌方法有哪些
1.干熱滅菌法
1.1灼燒與火焰滅菌：灼燒主要是用于接種工具滅菌，在火焰上灼燒即可達(dá)到徹底滅菌，火焰滅菌通常用于無菌操作中，將試管口、玻璃瓶口、硅氟塑料塞等反復(fù)通過火焰數(shù)次，利用火焰對管口等進(jìn)行滅菌，阻止管口污染，作為無菌操作過程中的輔助滅菌手段。
1.2干烤滅菌：利用熱輻射及干熱空氣進(jìn)行滅菌。一般將待檢滅菌的物品如金屬、玻璃、陶瓷制品包裝后，均可在烤箱內(nèi)干熱滅菌。通常加熱至160℃，保溫2h可完全滅菌。但不宜超過170℃，玻璃量具易變形。降溫過速，驟冷易引起玻璃器皿炸裂。干熱滅菌時裝入干烤箱內(nèi)的物品切勿緊密，應(yīng)有空隙，利于熱空氣流動，過密，致使溫度不均，部分物品滅菌不徹底。
2.濕熱滅菌法
通過加壓提高蒸汽溫度，用高壓蒸汽滅菌，穿透力強(qiáng)，溫度高，滅菌效果最好。
注意事項：1.完全排除高壓滅菌器內(nèi)的冷空氣。有冷空氣存在時，在同一表壓下所達(dá)到的溫度值要低，而冷空氣排出越少，溫度就低得越多。在高壓蒸汽滅菌時，為保證達(dá)到規(guī)定的溫度，必須將冷空氣完全排除。否則，雖然壓力達(dá)到，而溫度達(dá)不到規(guī)定的要求，滅菌就不徹底。
3.紫外線 殺菌譜廣，但穿透力弱，影響因素多，殺菌效能受到一定限制。
紫外線消毒效果與紫外線強(qiáng)度、照射時間、溫度與濕度等因素有關(guān)。
我國規(guī)定紫外燈照射強(qiáng)度距離1m處不低于70μw/cm2。一般紫外燈使用超過100h，則應(yīng)更換。表面有塵土，降低滅菌效果。紫外燈殺菌的溫度以20~40℃，相對濕度40%~60%為宜。
3.在食用菌栽培中紫外線滅菌應(yīng)注意什么
紫外線消毒注意事項：
1、嚴(yán)禁頻繁啟動紫外線殺菌儀，特別是在短時間內(nèi)，以確保紫外燈管壽命。
2、定期清洗：根據(jù)水質(zhì)情況，紫外線殺菌燈管和石英玻璃套管需要定期清洗，用酒精棉球或紗布擦試燈管，去除石英玻璃套管上污垢并擦凈，以免影響紫外線的透過率，而影響殺菌效果。
3、更換燈管時，先將燈管電源插座拔掉，抽出燈管，再將擦凈的新燈管小心地插入殺菌器內(nèi)，裝好密封圈，檢查有無漏水現(xiàn)象，再插上電源。注意勿以手指觸及新燈管的石英玻璃，否則會因污點影響殺菌效果。
4、預(yù)防紫外線輻射：紫外線對細(xì)菌有強(qiáng)大的殺傷力，對人體同樣有一定的傷害，啟動消毒燈時，應(yīng)避免對人體直接照射，必要時可使用防護(hù)眼鏡，不可直接用眼睛正視光源，以免灼傷眼膜.
4.培養(yǎng)基,培養(yǎng)器皿和植物材料通常怎樣滅菌
常用的滅菌方法可分為物理的和化學(xué)的兩類，即：物理方法如干熱（烘燒和灼燒）、濕熱（常壓或高壓蒸煮）、射線處理（紫外線、超聲波、微波）、過濾、清洗和大量無菌水沖洗等措施；化學(xué)方法是使用升汞、甲醛、過氧化氫、高錳酸鉀、來蘇水、漂白粉、次氯酸鈉、抗菌素、酒精化學(xué)藥品處理。
這些方法和藥劑要根據(jù)工作中的不同材料不同目的適當(dāng)選用。1、培養(yǎng)基用濕熱滅菌 培養(yǎng)基在制備后的24小時內(nèi)完成滅菌工序。
高壓滅菌的原理是：在密閉的蒸鍋內(nèi)，其中的蒸汽不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點不斷提高，從而鍋內(nèi)溫度也隨之增加。在0.1mpa的壓力下，鍋內(nèi)溫度達(dá)121℃。
在此蒸汽溫度下，可以很快殺死各種細(xì)菌及其高度耐熱的芽孢。注意完全排除鍋內(nèi)空氣，使鍋內(nèi)全部是水蒸氣，滅菌才能徹底。
高壓滅菌放氣有幾種不同的做法，但目的都是要排凈空氣，使鍋內(nèi)均勻升溫，保證滅菌徹底。常用方法是：關(guān)閉放氣閥，通電后，待壓力上升到0.05mpa時，打開放氣閥，放出空氣，待壓力表指針歸零后，再關(guān)閉放氣閥。
關(guān)閥再通電后，壓力表上升達(dá)到0.1mpa時，開始計時，維持壓力0.1-0.15mpa,20分鐘。按容器大小不同，保壓時間有所不同。
見表1。該表所列數(shù)字是徹底滅菌很保險的數(shù)字，如果容器體積較大，但是放置的數(shù)量很少，也可以減少時間。
表1. 培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌所必需的最少時間 容器的體積/ml 在121℃滅菌所需最少時間/min20-501575-15020250-50025100030 到達(dá)保壓時間后，即可切斷電源，在壓力到0.5mpa，可緩慢放出蒸汽，應(yīng)注意不要使壓力降低太快，以致引起激烈的減壓沸騰，使容器中的液體四溢。當(dāng)壓力降到零后，才能開蓋，取出培養(yǎng)基，擺在平臺上，以待冷凝。
不可久不放氣，引起培養(yǎng)基成分變化，以至培養(yǎng)基無法擺斜面。一旦放置過久，由于鍋爐內(nèi)有負(fù)壓，蓋子打不開，只要將放氣閥打開，大氣壓入，內(nèi)外壓力平衡，蓋子便易打開了。
對高壓滅菌后不變質(zhì)的物品，如無菌水、栽培介質(zhì)、接種工具，可以延長滅菌時間或提高壓力。而培養(yǎng)基要嚴(yán)格遵守保壓時間，既要保壓徹底，又要防止培養(yǎng)基中的成分變質(zhì)或效力降低，不能隨意延長時間。
對于一些布制品，如實驗衣、口罩等也可用高壓滅菌。洗凈晾干后用耐高壓塑料袋裝好，高壓滅局20-30分鐘。
高壓滅菌前后的培養(yǎng)基，其ph值下降0.2-0.3單位。高壓后培養(yǎng)基ph值的變化方向和幅度取決于多種因素。
培養(yǎng)基中成分單一時和培養(yǎng)基中含有高或較高濃度物質(zhì)時，高壓滅菌后的ph值變化幅度較大，甚至可大于2個ph值單位。環(huán)境ph值的變化大于0.5單位就有可能產(chǎn)生明顯的生理影響。
高壓滅菌通常會使培養(yǎng)基中的蔗糖水解為單糖，從而改變培養(yǎng)基的滲透壓。在8%-20%蔗糖范圍內(nèi)，高壓滅菌后的培養(yǎng)基約升高0.43倍。
培養(yǎng)基中的鐵在高壓滅菌時會催化蔗糖水解，可使15%-25%的蔗糖水解為葡萄糖和果糖。培養(yǎng)基值小于5.5，其水解量更多，培養(yǎng)基中添加0.1%活性炭時，高壓下蔗糖水解大大增強(qiáng)，添加1%活性炭，蔗糖水解率可達(dá)5%。
為防止高壓滅菌產(chǎn)生的上述一些變化可用下列方法：（1）經(jīng)常注意搜集有關(guān)高壓滅菌影響培養(yǎng)基成分的資料，以便及時采取有效措施。（2）設(shè)計培養(yǎng)基配方時盡量采用效果類似的穩(wěn)定試劑并準(zhǔn)確掌握劑量。
如避免使用果糖和山梨醇而用甘露醇，以IBA代替IAA，控制活性炭的用量（在0.1%以下）注意ph值對高壓滅菌下培養(yǎng)基中成分的影響等。（3）配制培養(yǎng)基時應(yīng)注意成分的適當(dāng)分組與加入的順序。
如將磷、鈣和鐵放在最后加入。（4）注意高壓滅菌后培養(yǎng)基ph值的變化及恢復(fù)動態(tài)。
如高壓滅菌后的ph值常由5.8升高至6.48。而96小時后又會降至5.8左右。
這樣在實驗中就可以根據(jù)這一規(guī)律加以掌握。2、用于無菌操作的器械采用灼燒滅菌 在無菌操作時，把鑷子、剪刀、解剖刀等浸入95%的酒精中，使用之前取出在酒精燈火焰上灼燒滅菌。
冷卻后，立即使用。操作中可采用250或500毫升的廣口瓶，放入95%的酒精，以便插入工具。
3、玻璃器皿及耐熱用具采用干熱滅菌 干熱滅菌是利用烘箱加熱到160-180℃的溫度來殺死微生物。由于在干熱條件下，細(xì)菌的營養(yǎng)細(xì)胞的抗熱性大為提高，接近芽孢的抗熱水平，通常采用170℃持續(xù)90分鐘來滅菌。
干熱滅菌的物品要預(yù)先洗凈并干燥，工具等要妥為包扎，以免滅菌后取用時重新污染。包扎可用耐高溫的塑料。
滅菌時應(yīng)漸進(jìn)升溫，達(dá)到預(yù)定溫度后記錄時間。烘箱內(nèi)放置的物品的數(shù)量不宜過多，以免防礙熱對流和穿透，到指定時間斷電后，待充分冷涼，才能打開烘箱，以免因驟冷而使器皿破裂。
干熱滅菌能源消耗太大，浪費(fèi)時間。4、不耐熱的物質(zhì)采用過濾滅菌 一些生長調(diào)節(jié)劑，如赤霉素、玉米素、脫落酸和某些微生物是不耐熱的，不能用高壓滅菌處理，通常采用過濾滅菌方法。
一些化學(xué)成分在高溫高壓下會發(fā)生降解而失去效能或降低效能。經(jīng)高溫滅菌后赤霉素GA3的活性僅及不經(jīng)高溫滅菌的新鮮溶液的10%。
蔗糖經(jīng)高溫后部分被降解成d-葡萄糖和d-果糖，果糖又可被部分水解，產(chǎn)生抑制培養(yǎng)的植物組織生長的物質(zhì)。高溫還可使碳水化合物和氨基酸發(fā)生反應(yīng)。
維生素具有不同程度的熱穩(wěn)定性，但如果培養(yǎng)基的ph值高于5.5,。
5.殺菌劑的注意事項有哪些
殺菌劑一般農(nóng)藥使用說明書都有推薦使用濃度，可以按說明使用，但最好還是根據(jù)當(dāng)?shù)刂脖＜夹g(shù)部門在藥效試驗基礎(chǔ)上提出的使用濃度進(jìn)行施用。
干旱或炎熱的夏天應(yīng)當(dāng)降低使用濃度，避免產(chǎn)生藥害。其次，使用殺菌劑時還要注意使用時期和使用次數(shù)，掌握好噴藥時期的關(guān)鍵是掌握病害發(fā)生和發(fā)展的規(guī)律，做好病害發(fā)生的預(yù)測預(yù)報工作，或根據(jù)當(dāng)?shù)刂脖２块T對作物病害的預(yù)測預(yù)報做好噴施殺菌劑的準(zhǔn)備。
一般情況下殺菌劑的噴灑都是在病害發(fā)生的初期進(jìn)行，如稻瘟病等，尤其在高溫天氣，稻瘟病發(fā)展快，應(yīng)立即噴藥。而花生葉斑病害發(fā)展比較慢，剛發(fā)病時不要輕易噴藥，更不能在發(fā)病前噴藥，而是在發(fā)病后形成一定的發(fā)展趨勢時開始噴藥。
氣候條件有利于病害迅速發(fā)展時要立即著手噴藥，有時為了控制病情不得不在下毛毛雨時候也噴藥。 噴藥時期決定于病害發(fā)展規(guī)律外，還要考慮到作物的生育期，很多病害的發(fā)生都是與作物的某一生育階段相聯(lián)系。
此外，還要注意作物各生育期對殺菌劑的耐受力，防止產(chǎn)生藥害。植物病害的發(fā)生和發(fā)展往往要一段時間，噴灑殺菌劑也很難一次解決問題，往往需要噴灑多次。
噴灑次數(shù)的多少主要決定于病菌再侵染情況，殺菌劑的殘效期以及氣候條件、光照、溫度和降雨等。種苗消毒。
浸種要用乳濁液和溶液，不能用懸浮液，即可濕性粉劑不能用來浸種。浸種的關(guān)鍵是藥液濃度和浸種時間，操作不當(dāng)會造成滅菌效果差或造成藥害。
其它因素如溫度、種子類型、病菌所在部位等也影響浸種效果。 一般情況下，在種子類型、氣溫、藥劑種類確定后，藥劑濃度和浸種時間是可以協(xié)調(diào)的，濃度高可適當(dāng)延長浸種時間。
病菌所在部位較深或種皮堅硬可適當(dāng)延長浸種時間，氣溫高可適當(dāng)縮短浸種時間。拌種時要求種子和藥粉都必須是干燥的，否則會造成拌種不均勻，產(chǎn)生藥害，影響種子的發(fā)芽率。
藥粉用量一般占種子重量的0。2%~0。
5%，拌種時藥劑和種子都要分成3~4批加入，然后適當(dāng)旋轉(zhuǎn)拌種容器使之拌和均勻。內(nèi)吸性殺菌劑出現(xiàn)以后，又出現(xiàn)了一種新的拌種方法--濕拌法。
即把藥粉用少量的水弄濕，然后拌種，或把干的藥粉拌在濕的種子上，使藥粉粘在種子表面，待播種之后，藥劑慢慢溶解并吸收到植物體內(nèi)向上傳導(dǎo)。 棉花枯萎病、黃瓜枯萎病等土傳病害，除了可以用浸種或拌種法防治外，還可以采用土壤消毒法防治。
土壤消毒首先要根據(jù)病害種類選擇適當(dāng)?shù)臍⒕鷦?，再根?jù)藥劑理化性質(zhì)與土壤結(jié)構(gòu)和性質(zhì)選擇適當(dāng)?shù)耐寥捞幚矸椒?。澆灌法適合于水溶性殺菌劑，將藥劑調(diào)整到適當(dāng)濃度以后，于每平方米地面上澆灌5~10千克左右的藥液，土壤較干燥時可以采用較低濃度的藥液，適當(dāng)增加澆灌體積；土壤潮濕時可以采用高濃度小體積澆灌法。
蒸氣壓較高的殺菌劑可以采用犁底或犁溝施藥，即將藥粉或藥液均勻撒入第一犁的溝底，用第二犁翻上的土將藥劑蓋住，此法不適合過于粘重的土壤，還可以將藥粉或藥液施在土壤表面后，隨即翻土將藥劑埋入土壤中。
