細菌特殊染色方法(細菌染色方法)
1.細菌有哪些染色方法
一、常用的染色方法有革蘭氏染色（最基本）、芽孢染色、莢膜染色、鞭毛染色等。
二、.1 革蘭染色法 （1）取含金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌的混合菌液涂片、干燥、固定；（2）染色：用結晶紫染液染1min，水沖洗；盧戈碘液染1min，水沖洗；0.4%復紅酒精溶液染30s，水沖洗；（3）吸干后鏡檢[2] 。
1.2 抗酸染色法 （1）取結核桿菌陽性的痰標本（已處理）涂片、干燥、固定。（2）染色：將石炭酸復紅染液沸水浴10min，滴加2~3滴覆蓋菌膜染色 5min，水沖洗，3%鹽酸酒精脫色30s，水沖洗；堿性美蘭復染30s，水沖洗。（3）吸干后鏡檢[3] 。
1.3 莢膜染色法 （1）取接種肺炎球菌死亡的小鼠腹腔液涂片、干燥、固定；（2）染色：用石炭酸復紅染液染1min，水沖洗；95%酒精脫色5s水沖洗；20%鞣酸溶液媒染10min水沖洗；0.8%孔雀綠溶液染色1min，水沖洗；（3）吸干后鏡檢[4] 。
1.4 芽胞染色法 （1）取等量破傷風桿菌厭氧培養(yǎng)菌液和5%孔雀綠水溶液，放入小試管中充分混合，沸水浴20min；取上述混合液涂片、干燥、固定；（2）用 1%沙黃液復染10min，水沖洗；（3）干后鏡檢。
2.1 革蘭染色 鏡下，金黃色葡萄球菌染成紫色、球形，為革蘭陽性菌；大腸埃希菌染成紅色、桿狀，為革蘭陰性菌。革蘭染色法是細菌學中最經典，應用最廣泛的染色法之一。脫色是影響革蘭染色的關鍵步驟，脫色時間長短直接關系到染色結果的準確性[5] 。脫色過度則革蘭陽性菌可能被誤染為革蘭陰性菌，脫色不 夠則革蘭陰性菌可能被誤染為革蘭陽性菌，為此學生難以把握?，F將原有四步染色法改為三步法，即把第三步酒精脫色和第四步復紅復染合并一步進行，使用 0.4%復紅酒精溶液作為復染劑，可達到脫色和復染雙重目的。這樣，就可以避免學生在四步法中因脫色時間不易掌握而造成染色的失敗，減少重復性實驗，提高了教學效果。
2.2 抗酸染色 鏡下，結核分枝桿菌染成紅色，為抗酸菌；背景和其他菌被染成藍色，為非抗酸菌。傳統(tǒng)的方法是滴加石炭酸復紅染液于涂片上，用玻片夾夾住涂片以微火煙葉熱，保持染液冒蒸汽約5min，此法學生容易使染液蒸干或使染液沸騰，從而影響染色效果和污染環(huán)境。改良后的方法是將染液直接加熱改為水浴后使用，克服上述的缺點，且染色效果良好。適合實驗教學使用。
2.3 莢膜染色 鏡下，肺炎球菌菌體染成紅色（成雙排列），莢膜染成綠色，存在于菌體的周圍。傳統(tǒng)的莢膜染色是用結晶紫染液染色，菌體染成紫色，莢膜染成淡紫色或無色，菌體和莢膜之間反差小，不易分辨。改良后，增加了脫色、媒染、復染的步驟，使菌體和莢膜之間反差增大，易于觀察，可用于學生實驗和示教片的制作。
2.4 芽胞染色 鏡下，破傷風桿菌的菌體染成紅色，芽胞染成綠色。傳統(tǒng)的方法是滴加石炭酸復紅染液于涂片上并弱火加熱，使染液冒蒸汽約5min，此法染液用量大，且容易污染衣物和實驗臺。現改為菌液和染液混合水浴加熱初染，然后制備涂片、固定、復染，即節(jié)約時間，染液消耗又少，且菌體、芽胞對比鮮明。此法適用于教學標本片的制作。
三、簡單染色法是利用單一染料對細菌進行染色的一種方法。
操作步驟
1.涂片：用灼燒滅菌冷卻后的接種環(huán)挑取少量菌體與水滴充分混勻，涂成極薄的菌膜。
2.干燥：可自然晾干，或將涂片置于火焰高處微熱烘干，但不能直接在火焰上烘烤。
3.固定：手執(zhí)玻片一端，有菌膜的一面朝上，通過迅速通過火焰2-3次（用手指觸涂片反面，以不燙手為宜）。
4.染色：加適量（以蓋滿菌膜為度）結晶紫染色液（或石炭酸復紅液），染l~2min。
5.水洗：用自來沖洗至流下的水中無染色液的顏色時為止。
6.干燥
7.鏡檢
2.細菌染色方法有哪些
1 革蘭氏染色法 是最常用的鑒別染色法之一。此法起始1881年，染色步驟是先用結晶紫或龍膽紫染液加于已固定好的標本上使之著色，其后加碘液作媒染劑，再用酒精脫色，最后用復紅或沙黃復染。革蘭氏染色的結果與培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)條件及操作技術等有密切關系。如涂片太厚影響酒精脫色，革蘭氏陰性菌則可染成革蘭氏陽性菌。脫色時若酒精作用時間太長， ，莢膜不著色，包繞在菌體周圍，成為一層透明的空圈。 5 熒光染色法 用熒光染料，如金胺、吖啶橙等進行染色。細菌用熒光染料著色后在熒光顯微鏡下檢查，可在黑的背景中觀察到細菌發(fā)出明亮的熒光。用熒光染色法檢查細菌，有加快檢查速度和提高陽性率等優(yōu)點。
3.給細菌染色的方法都有幾種,怎么操作,都用復紅染色
給細菌染色的方法都有幾種，怎么操作，都用復紅染色
簡單染色法：利用單一染料對細菌進行染色的一種方法.例如番紅.
1.涂片：用灼燒滅菌冷卻后的接種環(huán)挑取少量菌體與水滴充分混勻，涂成極薄的菌膜.
2.干燥：可自然晾干，或將涂片置于火焰高處微熱烘干，但不能直接在火焰上烘烤.
3.固定：手執(zhí)玻片一端，有菌膜的一面朝上，通過迅速通過火焰2-3次（用手指觸涂片反面，以不燙手為宜）.
4.染色：加適量（以蓋滿菌膜為度）結晶紫染色液（或石炭酸復紅液），染l~2min.
5.水洗：用自來沖洗至流下的水中無染色液的顏色時為止.
6.干燥
7.鏡檢
復染色：利用用兩種以上染料對細菌進行染色.例如革蘭氏染色法.
革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟，需要堿性染料（basic dye）初染液；媒染劑（mordant）；脫色劑（decolorising agent）和復染液（counterstain）.
堿性染料初染液的象在細菌的單染色法基本原理中所述的那樣，而用于革蘭氏染色的初染液一般是結晶紫（crystal violet）.媒染劑的作用是增加染料和細胞之間的親和性或附著力，即以某種方式幫助染料固定在細胞上，使不易脫落，碘（iodine ）是常用的媒染劑.脫色劑是將被染色的細胞進行脫色，不同類型的細胞脫色反應不同，有的能被脫色，有的則不能，脫色劑常用95%的酒精（ethanol）.復染液也是一種堿性染料，其顏色不同于初染液，復染的目的是使被脫色的細胞染上不同于初染液的顏色，而未被脫色的細胞仍然保持初染的顏色，而且將細胞區(qū)分成G+和G-兩大類群，常用的復染液為番紅.
1.載玻片固定.在無菌操作條件下，用接種環(huán)挑取少量細菌于干凈的載玻片上涂布均勻，在火焰上加熱以殺死菌種并使其粘附固定.
2.草酸銨結晶紫染1分鐘.
3.自來水沖洗，去掉浮色.
4.用碘-碘化鉀溶液媒染1分鐘，傾去多余溶液.
5.用中性脫色劑如乙醇（95%）或丙酮酸脫色30秒，革蘭氏陽性菌不被褪色而呈紫色，革蘭氏陰性菌被褪色而呈無色.
6.用番紅染液或者沙黃復染30秒，革蘭氏陽性菌仍呈紫色，革蘭氏陰性菌則呈現紅色.
4.給細菌染色的方法都有幾種,怎么操作,都用復紅染色嗎
常用的細菌染色方法有簡單染色和革蘭氏染色。1、簡單染色是利用單一染料對細菌進行染色，常用堿性染料如美藍、結晶紫、堿性復紅等。方法很簡單：（一）制片：進行無菌涂片->；自然風干->；微火固定 （二）染色：例如用美藍染色3-5分鐘，濾紙吸干后就可以置于顯微鏡下觀察了
2、革蘭氏染色：使用非常普遍。方法：（1）用堿性染料結晶紫對菌液涂片進行初染（2）用碘液進行媒染（3）用乙醇沖洗以脫色（4）用一種與結晶紫不同顏色的堿性染料進行復染如沙黃。
這些實驗都很簡單，到時候你親自做一遍就會很明白了，你現在只需弄清原理和簡單過程就行。
5.細菌細胞染色的方式有哪幾種,各有什么優(yōu)缺點
質粒是細菌染色體外的遺傳物質，多為環(huán)狀雙螺旋DNA分子。
質?？梢宰陨韽椭?，質粒是自行復制單位，有的需與核質染色體的復制同步，稱為嚴緊型復制（stringent replication）。 質粒編碼細菌各種重要的生物學性狀。
編碼性菌毛的質粒稱致育質粒或F質粒（fertility plasmid），具有F質粒的細菌有性菌毛。編碼細菌各種毒力因子的質粒統(tǒng)稱毒力質?；颌鲑|粒（virulence plasmid），如致病性大腸桿菌在黏膜上定居及產生毒素的能力可由不同質粒編碼，其中K質粒編碼對黏膜具有黏附活性的菌毛，ST質粒與LT質粒分別編碼耐熱腸毒素和不耐熱腸毒素。
細菌對抗菌藥物或重金屬鹽類的抗性則由R質粒（resistance plasmid）所決定。一個質粒可同時具有幾種編碼功能。
有的質粒還可以結合到染色體上，如F質粒在變形桿菌內是獨立存在的，但在大腸桿菌內則可與染色體結合，這種質粒稱為附加體（episome）。 轉座因子 （transposable element）近年來發(fā)現微生物的某些DNA片段作為一個獨立單位可在染色體上移動，此種移動甚至可發(fā)生在不同種細胞之間。
這種可移動的DNA片段稱之為轉座因子。細菌的轉座因子有三種類型：插入序列（insert sequence,IS）、轉座子（transposon,Tn）以及某些特殊的噬菌體。
毒力島 （pathogen。質粒是細菌染色體外的遺傳物質，多為環(huán)狀雙螺旋DNA分子。
質?？梢宰陨韽椭?，質粒是自行復制單位，有的需與核質染色體的復制同步，稱為嚴緊型復制（stringent replication）。 質粒編碼細菌各種重要的生物學性狀。
編碼性菌毛的質粒稱致育質?；騀質粒（fertility plasmid），具有F質粒的細菌有性菌毛。編碼細菌各種毒力因子的質粒統(tǒng)稱毒力質?；颌鲑|粒（virulence plasmid），如致病性大腸桿菌在黏膜上定居及產生毒素的能力可由不同質粒編碼，其中K質粒編碼對黏膜具有黏附活性的菌毛，ST質粒與LT質粒分別編碼耐熱腸毒素和不耐熱腸毒素。
細菌對抗菌藥物或重金屬鹽類的抗性則由R質粒（resistance plasmid）所決定。一個質粒可同時具有幾種編碼功能。
有的質粒還可以結合到染色體上，如F質粒在變形桿菌內是獨立存在的，但在大腸桿菌內則可與染色體結合，這種質粒稱為附加體（episome）。 轉座因子 （transposable element）近年來發(fā)現微生物的某些DNA片段作為一個獨立單位可在染色體上移動，此種移動甚至可發(fā)生在不同種細胞之間。
這種可移動的DNA片段稱之為轉座因子。細菌的轉座因子有三種類型：插入序列（insert sequence,IS）、轉座子（transposon,Tn）以及某些特殊的噬菌體。
毒力島 （pathogenicity island,PAl）是20世紀90年代提出的一個新概念。PAI指病原菌的某個或某些毒力基因群，分子結構與功能有別于細菌染色體，但位于細菌染色體之內，因此稱之為‘島”。
PAI雖然是染色體的DNA片段，但兩端往往具有重復序列與插入元件，其G+C%及密碼使用與細菌染色體有明顯差異，分子量多為30~40kb，也有達100kb者。
