提取植物dna方法方法(植物DNA提取的原理和方法是什么)
1.植物DNA提取的原理和方法是什么
原發(fā)布者：Z12C21
DNA提取方法簡(jiǎn)介DNA提取的幾種方法基因組DNA的提取CTAB法SDS法其它DNA提取的幾種方法非基因組DNA的提取質(zhì)粒DNA的提取?堿裂解法?煮沸法線粒體、葉綠體DNA的提取?差速離心結(jié)合SDS裂解法基因組DNA-CTAB法CTAB法原理（植物DNA提取經(jīng)典方法）CTAB(，十六烷基三甲基溴化銨)，是一種陽(yáng)離子去污劑，可溶解細(xì)胞膜，并與核酸形成復(fù)合物。具有從低離子強(qiáng)度的溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性，在這種條件下，蛋白質(zhì)和中性多聚糖仍留在溶液里該復(fù)合物在高鹽溶液中（>0.7mol/LNaCl）是可溶的，通過(guò)有機(jī)溶劑抽提，去除蛋白、多糖、酚類(lèi)等雜質(zhì)后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來(lái)。植物材料之前必須預(yù)熱，且離心時(shí)溫度不要低于15℃。注：CTAB溶液在低于15℃時(shí)會(huì)形成沉淀析出，因此在將其加入冰冷的基因組DNA-CTAB法CTAB提取緩沖液的經(jīng)典配方組份終濃度Tris-HClEDTANaCl(pH8.0)(pH8.0)100mM20mM1.4MCTAB2%(W/V)β-巰基乙醇0.1%(V/V)使用前加入Tris-HCl(pH8.0)提供一個(gè)緩沖環(huán)境，防止核酸被破壞；EDTA螯合Mg2+或Mn2+離子，抑制DNase活性；NaCl提供一個(gè)高鹽環(huán)境，使DNP（脫氧核糖核蛋白）。CTAB溶解細(xì)胞膜，并結(jié)合核酸，使核酸便于分離；β-巰基乙醇是抗氧化劑，有效地防止酚氧化成醌，避免褐變，使酚容易去除基因組DNA-CT
2.提取DNA的方法有哪些
DNA提取的幾種方法
(1).濃鹽法
利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1M 氯 納提取化鈉抽提，得到的DNP粘液與含有少量辛醇的 氯仿一起搖蕩，使乳化，再離心除去蛋白質(zhì)，此時(shí)蛋白質(zhì)凝膠停留在水相及氯仿相中間，而DNA位于上層水相中，用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽沉淀出來(lái).
也可用0.15 MNaCL液反復(fù)洗滌細(xì)胞破碎液除去RNP，再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白，再按氯仿---異醇法除去蛋白.
兩種方法比較，后種方法使核酸降解可能少一些.
以稀鹽酸溶液提取DNA 時(shí)，加入適量去污劑，如SDS可有助于蛋白質(zhì)與DNA 的分離.在提取過(guò)程中為抑制組織中的DNase對(duì)DNA 的降解作用，在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL,0.015M檸檬鈉，并稱SSC溶液，提取DNA.
(2).陰離子去污劑法：
用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質(zhì)變性，可以直接從生物材料中提取DNA .由于細(xì)胞中DNA與蛋白質(zhì)之間常借靜電引力或配位鍵結(jié)合，因?yàn)殛庪x子去污劑能夠破壞這種價(jià)鍵，所以常用陰離子去污劑提取DNA.
(3).苯酚抽提法：
苯酚作為蛋白變性劑，同時(shí)抑制了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時(shí)，由于蛋白與DNA 聯(lián)結(jié)鍵已斷，蛋白分子表面又含有很多極性基團(tuán)與苯酚相似相溶.蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相.離心分層后取出水層，多次重復(fù)操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性質(zhì)，用乙醇沉淀DNA .此時(shí)DNA是十分粘稠的物質(zhì)，可用玻璃漫漫繞成一團(tuán)，取出.此法的特點(diǎn)是使提取的DNA保持天然狀態(tài) .
( 4).水抽提法：
利用核酸溶解于水的性質(zhì)，將組織細(xì)胞破碎后，用低鹽溶液除去RNA，然后將沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中，離心后收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調(diào)節(jié)至2.6M.加入2倍體積95%乙醇，立即用攪拌法攪出.然后分別用66% 80%和95%乙醇以及丙銅洗滌，最后在空氣中干燥，既得DNA樣品.此法提取的DNA中蛋白質(zhì)含量較高，故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良，在提取過(guò)程中加入SDS.
3.植物DNA提取的原理和方法是什么
原理就是去掉植物細(xì)胞壁 細(xì)胞膜 質(zhì)體 線粒體 葉綠體 剩下細(xì)胞核了。就是DNA了。
通常采用機(jī)械研磨的方法破碎植物的組織和細(xì)胞，由于植物細(xì)胞勻漿含有多種酶類(lèi)（尤其是氧化酶類(lèi)）對(duì)DNA的抽提產(chǎn)生不利的影響，在抽提緩沖液中需加入抗氧化劑或強(qiáng)還原劑（如巰基乙醇）以降低這些酶類(lèi)的活性。在液氮中研磨，材料易于破碎，并減少研磨過(guò)程中各種酶類(lèi)的作用。
十二烷基肌酸鈉（sarkosyl）、十六烷基三甲基溴化銨（hexadyltrimethyl ammomum bromide，簡(jiǎn)稱為CTAB）、十二烷基硫酸鈉（sodium dodecyl sulfate，簡(jiǎn)稱SDS）等離子型表面活性劑，能溶解細(xì)胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，從而使DNA得以游離出來(lái)。再加入苯酚和氯仿等有機(jī)溶劑，能使蛋白質(zhì)變性，并使抽提液分相，因核酸（DNA、RNA）水溶性很強(qiáng)，經(jīng)離心后即可從抽提液中除去細(xì)胞碎片和大部分蛋白質(zhì)。上清液中加入無(wú)水乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于TE溶液中，即得植物總DNA溶液
4.植物組織中DNA用什么方法提取與測(cè)定
脫氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid,DNA）是一切生物細(xì)胞的重要組成成分，主要存在于細(xì)胞核中，鹽溶法是提取DNA的常規(guī)技術(shù)之一。從細(xì)胞中分離得到的DNA是與蛋白質(zhì)結(jié)合的DNA，其中還含有大量RNA，即核糖核蛋白。如何有效地將這兩種核蛋白分開(kāi)是技術(shù)的關(guān)鍵。DNA不溶于0.14mol/L 的NaCl溶液中，而RNA則能溶于0.14mol/L 的NaCl溶液之中，利用這一性質(zhì)就可以將二者從破碎細(xì)胞漿液中分開(kāi)。制備過(guò)程中，細(xì)胞破碎的同時(shí)就有Dnase釋放到提取液中，使DNA因被降解而影響得率，在提取緩沖液中加入適量的檸檬酸鹽和EDTA，既可抑制酶的活性又可使蛋白質(zhì)變性而與核酸分離，再加入陰離子去垢劑0.15%的SDS，經(jīng)過(guò)2h攪拌，或用氯仿-異醇除去蛋白，通過(guò)離心使蛋白質(zhì)沉淀而除去，得到的是含有核酸的上清液。然后用95%的預(yù)冷乙醇即可把DNA從除去蛋白質(zhì)的提取液中沉淀出來(lái)。
生物幫上面有這方面的詳細(xì)介紹，多肽產(chǎn)品
