沉淀蛋白質(zhì)方法(蛋白質(zhì)沉淀的方法有那些,各有什么特點(diǎn))
1.蛋白質(zhì)沉淀的方法有那些,各有什么特點(diǎn)
沉淀蛋白質(zhì)的方法主要有：鹽析、有機(jī)溶劑、生物堿試劑、重金屬鹽、加熱凝固。
分析如下：
(1)鹽析破壞蛋白質(zhì)的水化膜和電荷，采用不同濃度鹽可將不同的蛋白質(zhì)分段析出，鹽析的蛋白質(zhì)不變性，鹽析作用是可逆的。（2）有機(jī)溶劑可破壞蛋白質(zhì)的水化膜，若調(diào)節(jié)pH=pI，則更易沉淀。低溫操作，快速分離溶劑不會使蛋白質(zhì)變性，而常溫操作，蛋白質(zhì)易變性。（3）沉淀生物堿試劑：鎢酸、三氯乙酸等的酸根與帶正電荷的蛋白質(zhì)結(jié)合沉淀，會使蛋白質(zhì)變性。（4）重金屬離子可與帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)結(jié)合沉淀，會使蛋白質(zhì)變性。（5）在等電點(diǎn)加熱蛋白質(zhì)可形成凝塊沉淀，會使蛋白質(zhì)變性。
2.常用的沉淀蛋白質(zhì)的方法有哪些
前已有很多去蛋白方法可供使用，但使用各種方法之前應(yīng)了解該方法是否會導(dǎo)致生物樣品中的藥物發(fā)生分解或影響藥物的提取等。
通常除蛋白的方法是在含蛋白樣品中加入適當(dāng)?shù)某恋韯┗蜃冃詣?，而有機(jī)溶劑和酸類沉淀的蛋白是不可逆的。也可用透析法與超濾法除去樣品中蛋白。
當(dāng)然還可以熱沉淀，使蛋白質(zhì)脫水而沉淀（如有機(jī)溶劑、中性鹽），有的是由于蛋白質(zhì)形成不溶性鹽而析出（如高氯酸），離心后取上清液用于分析。甲醇、乙腈、丙酮和乙醇是沉淀蛋白常用的有機(jī)溶劑，中性鹽可用氯化銨等。無機(jī)鹽沉淀蛋白是可逆的，即將蛋白稀釋后仍具有生理活性
3.常用蛋白質(zhì)沉淀方法有哪些
一般最常見的是鹽析沉淀，就是在蛋白質(zhì)溶液中加入一定量的硫酸銨，蛋白質(zhì)便會沉淀下來，不同蛋白沉淀所需要的硫酸銨濃度不一樣，通過這個(gè)方法也可以對蛋白進(jìn)行初步的純化分離。
再有就是等電沉淀，通過調(diào)節(jié)蛋白溶液的pH，使其剛好達(dá)到目標(biāo)蛋白的等電點(diǎn)，這時(shí)候蛋白分子將不帶有電荷，在相互碰撞聚集過程中沉淀下來。與之類似的有通過加沉淀劑或絮凝劑比如明礬之類的，也可以沉淀蛋白。
另外還有就是親和沉淀，利用生物分子親和力，比如抗原抗體親和、酶與底物親和等性質(zhì)，將配對的另一半固定在某些介質(zhì)，比如小磁珠上，就能將溶液里面的目的蛋白抓住沉淀下來。
4.蛋白質(zhì)沉淀有哪幾種方法
蛋白質(zhì)沉淀 蛋白質(zhì)在溶液中的穩(wěn)定性是有條件的、相對的.如果條件發(fā)生改變，破壞了蛋白質(zhì)溶液的穩(wěn)定性，蛋白質(zhì)分子則聚集成大的顆粒沉淀出來.
蛋白質(zhì)溶液的穩(wěn)定性與質(zhì)點(diǎn)大小、電荷和水化作用有關(guān)，只要破壞這些條件，蛋白質(zhì)自然會從溶液中沉淀出.
沉淀蛋白質(zhì)有以下方法：
1、鹽析法
2、有機(jī)溶劑沉淀法
3、重金屬鹽沉淀法
4、生物堿試劑和某些酸（三氯醋酸，磺基水楊酸，硝酸等）沉淀法
5、加熱變性沉淀法
蛋白質(zhì)變性：蛋白質(zhì)的天然構(gòu)象遭到破壞導(dǎo)致其生物活性喪失的現(xiàn)象.蛋白質(zhì)在受到光照、熱、有機(jī)溶劑以及一些變性劑的作用時(shí)，次級鍵受到破壞，導(dǎo)致天然構(gòu)象的破壞，使蛋白質(zhì)的生物活性喪失.
蛋白質(zhì)分子凝聚從溶液中析出的現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)沉淀（precipitation），變性蛋白質(zhì)一般易于沉淀，但也可不變性而使蛋白質(zhì)沉淀，在一定條件下，變性的蛋白質(zhì)也可不發(fā)生沉淀.
蛋白質(zhì)所形成的親水膠體顆粒具有兩種穩(wěn)定因素，即顆粒表面的水化層和電荷.若無外加條件，不致互相凝集.然而除掉這兩個(gè)穩(wěn)定因素（如調(diào)節(jié)溶液pH至等電點(diǎn)和加入脫水劑）蛋白質(zhì)便容易凝集析出.
可以看出，如將蛋白質(zhì)溶液pH調(diào)節(jié)到等電點(diǎn)，蛋白質(zhì)分子呈等電狀態(tài)，雖然分子間同性電荷相互排斥作用消失了.但是還有水化膜起保護(hù)作用，一般不致于發(fā)生凝聚作用，如果這時(shí)再加入某種脫水劑，除去蛋白質(zhì)分子的水化膜，則蛋白質(zhì)分子就會互相凝聚而析出沉淀；反之，若先使蛋白質(zhì)脫水，然后再調(diào)節(jié)pH到等電點(diǎn)，也同樣可使蛋白質(zhì)沉淀析出.
