離子色譜法使用(離子色譜系統(tǒng)的使用和維護(hù)需要的注意事項(xiàng)有哪些)
1.離子色譜系統(tǒng)的使用和維護(hù)需要的注意事項(xiàng)有哪些
離子色譜系統(tǒng)的使用和維護(hù)注意事項(xiàng)
1. 試劑用水需要到達(dá) 18.2M，洗脫液必須經(jīng) 0.45um 或更小的濾膜抽濾（必 要時(shí)可用二層濾膜過(guò)濾）真空脫氣后才可使用。濾膜為一次性，每次使 用前需要先過(guò)濾高純水以清洗干凈。抑制器再生液可以不過(guò)濾脫氣。
2. 環(huán)境必須無(wú)腐蝕氣體，通風(fēng)良好。 樣品一定要去除固體微粒后才能進(jìn)樣。如樣品比較臟可以先用濾紙粗濾 后再過(guò) 0.45um 的濾膜過(guò)濾，一定要得到澄清液后才經(jīng)濾頭進(jìn)樣。對(duì)有顏 色的骯臟的樣品要用做前處理后才可進(jìn)樣。
3. 洗脫液試劑需要優(yōu)級(jí)純以上。 分析柱不可摔打碰撞。 分析柱上有箭頭表示洗脫液流進(jìn)和流出的方向，不可以接反。 安裝分析柱時(shí)，為避免氣泡產(chǎn)生請(qǐng)按下述順序安裝： 擰開分析柱進(jìn)口接 頭螺絲，裝好配制的洗脫液，排氣泡后啟動(dòng) IC 泵，待有溶液從管接頭流 出后，把分析柱進(jìn)口接頭螺絲擰緊，待有溶液從分析柱出口流出時(shí)，不 要急于擰上出口接頭螺絲，讓溶液沖洗分析柱 5 分鐘左右，然后再接上 分析柱出口接頭螺絲。
4. 必須在有保護(hù)柱的情況下做樣。 不要把樣品中的氣泡注射入分析柱。 10. 裝標(biāo)準(zhǔn)的容量瓶不可用酸泡。
5. 高壓 IC 泵不可空轉(zhuǎn)。
6. 每天關(guān)機(jī)前要用淋洗脫液沖洗分析柱 30 分鐘。
7. 電腦中的電源管理和屏幕保護(hù)要關(guān)閉。
2.請(qǐng)問(wèn)離子色譜儀具體操作步驟有哪些
操作步驟 ：
1、打開鋼瓶氣源開關(guān)，分壓表調(diào)到0.2-0.3（建議不關(guān)閉鋼瓶氣源）；
2、調(diào)節(jié)減壓閥到3-6Psi左右；
3、依次打開SP泵、EG淋洗液自動(dòng)發(fā)生器、DC色譜單元、AS自動(dòng)進(jìn)樣器和VWD紫外檢測(cè)器的電源開關(guān)。
4、如儀器長(zhǎng)時(shí)間不使用或更換淋洗液后，要先打開平衡泵頭上的PRIME閥排氣。
5、打開電腦，待右下角變色龍服務(wù)器圖標(biāo)變灰色后，雙擊桌面的變色龍，打開控制面板。
6、開泵，根據(jù)連接的柱子設(shè)定泵流速（氨基酸0.22；糖PA10 1；糖PA200 0.4；陰離子1或1.2；氫氧化鉀濃度30mM；陽(yáng)離子CS18:0.25）；設(shè)定柱箱溫度（30度）；
電導(dǎo)檢測(cè)器：根據(jù)具體的試驗(yàn)條件，在控制面板DC頁(yè)面選定抑制器類型和電流；在CD頁(yè)面設(shè)定并開啟檢測(cè)器溫度。
電化學(xué)檢測(cè)器：在ED頁(yè)面打開池子電壓，選擇CVMODE為INTAMP并
選定波形（WAVEFORM）。
7、系統(tǒng)平衡
8、編輯運(yùn)行樣品表（SEQUENCE）
9、系統(tǒng)平衡好后，停止采集基線，啟動(dòng)樣品表（依次點(diǎn)擊BATCH、START），選擇要運(yùn)行的樣品表。
10、做完樣后雙擊打開第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，點(diǎn)擊QNT-EDITER，進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。
11、關(guān)機(jī)前的工作
陰離子：如果樣品很復(fù)雜，先用高濃度氫氧化鈉（50-60mM氫氧化鈉）清洗系統(tǒng)15-20分鐘，然后在調(diào)到30mM正常濃度清洗30分鐘；
陽(yáng)離子：用正常淋洗液條件（5mM）沖洗系統(tǒng)20分鐘；
糖PA10：使用200mM氫氧化鈉沖洗系統(tǒng)15分鐘，然后再換成18mM清洗15-20分鐘；
氨基酸：最好在結(jié)束樣品后走一空白梯度或進(jìn)針?biāo)咭?5分鐘的梯度；
糖PA200：用100mM氫氧化鈉/50mM醋酸鈉走20分鐘 。
12、關(guān)機(jī)
陰陽(yáng)離子：將抑制器電流關(guān)掉，然后將泵逐步降為0； 氨基酸、糖：將電化學(xué)檢測(cè)池電壓關(guān)掉，然后將泵逐步降為0。 接著，斷開AS、DC、EG、DP、VWD的連接。關(guān)閉各設(shè)備的電源。建議不要關(guān)掉氮?dú)狻?/p>
3.以離子交換色譜法為例,簡(jiǎn)述濕法裝柱的操作過(guò)程和注意事項(xiàng)
1.樣品處理：對(duì)被分離樣品有時(shí)要經(jīng)過(guò)水解等化學(xué)處理，樣品溶液一般要兼顧到濃度與粘度兩方面。
+ B4 ^: J i3 _) \- T: R/ |" v2.離子交換柱的安裝：層析柱內(nèi)徑必須粗細(xì)均勻，柱管大小可據(jù)實(shí)際需要選擇。柱下端膠塞中插入一放液管，膠塞上蓋以園形尼龍綢或發(fā)泡塑料片以防止交換樹脂流出。
+ H/ ?0 X, d' E2 P8 h& S- U3.裝柱：⑴裝柱質(zhì)量是確保柱層析分離效果的技術(shù)關(guān)鍵之一，越是高技術(shù)層析（如使用毛細(xì)管層析柱的高級(jí)層析設(shè)備）裝柱的技術(shù)要求和難度越高，以至手工操作很難達(dá)到。⑵裝柱的質(zhì)量要求，無(wú)論是手工、機(jī)械、自動(dòng)化裝柱都是一樣的，要求裝入柱中的分離載體材料松緊適度，分布均勻，無(wú)氣泡、無(wú)斷層、無(wú)結(jié)節(jié)，能保持正常的溶脹形態(tài)和結(jié)構(gòu)；⑶裝入柱中樹脂的高度與直徑之比因分離對(duì)象和分離目的不同而相差很大，本教材推薦的肝素鈉洗脫柱裝柱高度是柱徑的4~6倍。
⑷操作次序，以手工裝入溶脹的D254樹脂（濕法裝柱）為例，其操作程序可概括為：①查連接（柱與塞之間、上下塞與進(jìn)出液管之間、梯度混合器與進(jìn)液管之間、出液管與收集器之間等等的連接是否正確、緊密），②試止漏（塞子、接頭、活塞開關(guān)處在長(zhǎng)時(shí)間滿負(fù)荷下不泄漏），③加隔離緩沖墊（緊貼于柱子下端塞子的內(nèi)平面），④加少許平衡液于空柱內(nèi)，⑤趕氣泡（緩沖墊內(nèi)和出水管中的氣泡），⑥開通放水開關(guān)，⑦與放水量保持相當(dāng)?shù)牧魉?，向柱?nèi)勻速加完載體材料漿，⑧關(guān)閉放水開關(guān)，令樹脂自然下沉，⑨用洗滌液和清水洗滌樹脂，⑩最后用緩沖液過(guò)柱和平衡柱，使樹脂結(jié)構(gòu)平衡穩(wěn)定，⑾在樹脂表面蓋上一片尼龍或泡膜塑料，并與柱子內(nèi)壁保持嚴(yán)密接觸，以防加樣時(shí)樹脂泛起。 （ ？6 Y, g6 D5 S2 e- z% v b* m4.加樣：緩緩打開柱子下端的放液開關(guān)，使柱內(nèi)液面剛好降至樹脂面時(shí)便立即將樣品溶液小心地加到尼龍或泡膜塑料片上，待樣品液面剛好進(jìn)入樹脂層內(nèi)便立即加入少許平衡緩沖液，以清洗粘附在覆蓋層中的樣品，并隨之進(jìn)入樹脂層。
當(dāng)柱內(nèi)液位接近樹脂表面時(shí)便立即添加洗滌液進(jìn)行洗滌操作。$ o+ c9 M: n3 `% Q 5.洗滌：選用合適的洗滌液、恰當(dāng)?shù)目傆昧考跋礈炝魉伲⌒南礈熘鶅?nèi)樹脂，以除去不被離交樹脂吸附的雜質(zhì)。
： K0 s* j/ p; W4 d） o7 W6 _ 6.洗脫：由洗脫曲線找出洗脫液的最佳濃度和適當(dāng)?shù)目偭?、操作壓及流速進(jìn)行洗脫。 5 m- U F# X! m' M. O# g! |7.監(jiān)測(cè)：用敏感快速的方法（參見下文“測(cè)定”）監(jiān)測(cè)分離成分是否洗脫出來(lái)以及洗脫峰的軸向分布 9 v2 C$ h- _- \: S8.收集：一旦發(fā)現(xiàn)待分離成分洗脫出來(lái)便可進(jìn)行一步或分步收集，并可根據(jù)各成分洗脫峰的軸向分布和濃度監(jiān)測(cè)，決定產(chǎn)品收集濃度區(qū)段，棄去的洗脫液可循環(huán)用于相同成分的洗脫。
1 v7 I2 v8 H, m8 y3 ] M; J8 m9.沉淀/離心：用沉淀劑可將分離組分沉淀或離心下來(lái)脫水干燥，沉淀劑回收再用。 " a3 @7 z0 a' t10.脫水干燥：加入適當(dāng)脫水劑為如無(wú)水乙醇、丙酮或乙醚脫水后進(jìn)一步干燥。
5 _" H" J" X0 e% v" V 11.測(cè)定：對(duì)層析所得產(chǎn)品可稱重或測(cè)定活性計(jì)算其得量和收率。. ^7 ]4 x, e- `1 p# y- z. d7 g9 m5 ` 【注意事項(xiàng)】4 G; U! }* `$ X7 C" b: b0 f 1.應(yīng)根據(jù)被分離物質(zhì)的理化性質(zhì)、分子大小、分子形狀和分離的目的要求，選擇分離效果好、交換容量大而機(jī)械強(qiáng)度較高的分離載體材料。
市售的分離載體有明確的規(guī)格型號(hào)、理化性質(zhì)、功能作用、活化再生和保養(yǎng)存放等技術(shù)參數(shù)資料可供用戶選擇。 * K7 Q, U. T% x8 y5 R2.應(yīng)根據(jù)分離純化的對(duì)象、規(guī)模選擇層析柱的長(zhǎng)短、粗細(xì)、柱高與內(nèi)徑之比，使達(dá)到最佳分離效果；此外，柱子材料的化學(xué)性質(zhì)要穩(wěn)定、透明，內(nèi)徑要均一、光滑，死腔要愈小愈好，要有利于緊固、連接、裝柱與維護(hù)。
4 E& F! k7 Q. W3 [& s/ k( ?- P3.柱子安放要垂直、穩(wěn)固，與之相連的各種線路、管道、設(shè)備、設(shè)施的布局和連接要緊奏，要方便操作、觀察與維護(hù)。4 F5 w( v8 w+ c4 C 4.要求裝入柱中的分離載體材料松緊適度，分布均勻，無(wú)氣泡、無(wú)斷層、無(wú)結(jié)節(jié)，能保持正常的溶脹形態(tài)和結(jié)構(gòu)。
5 F n1 O% }8 d z+ T0 L# t2 |3 C 5.保持柱內(nèi)樹脂層面平整、層序結(jié)構(gòu)始終如一是確保柱層析分離效果的又一技術(shù)關(guān)鍵。為此，從裝柱到洗脫結(jié)束的過(guò)程中，尤其是加樣、洗滌、洗脫過(guò)程中要始終保持柱內(nèi)液位不低于柱內(nèi)樹脂的頂部平面，尤其要始終保持柱內(nèi)樹脂的層序結(jié)構(gòu)始終如一，不被打亂，特別要防止更換濃度不同的洗滌洗脫液時(shí)發(fā)生“翻缸”而攪亂樹脂層結(jié)構(gòu)，“壓缸”而造成柱層斷裂和梗塞斷流。
7 z/ W" C+ E8 q: i& t g6.注意保持一定的操作壓，這對(duì)確保層析柱流速和分離效果十分重要。因?yàn)榱魉俨粌H與洗脫液加在柱上的壓力（因液面差造成）有關(guān)，也與裝柱材料的粒度、交聯(lián)度、機(jī)械強(qiáng)度有關(guān)。
應(yīng)針對(duì)具體情況建立一個(gè)操作壓、流速和分離效果的最佳平衡點(diǎn)。 ； N( j K7 n0 T" {9 [$ S6.顯著標(biāo)明各種洗滌、洗脫液的技術(shù)參數(shù)，嚴(yán)禁亂用和混用。
) M) k" o* {2 g( F 7.制作洗脫曲線，確定洗脫液收集方案，設(shè)置洗脫監(jiān)控點(diǎn)。2 N; I* F% \6 e9 I5 J% X1 V 8.注意剔除破損樹脂，及時(shí)補(bǔ)足流失、破損的循環(huán)樹脂量。
# S5 F F8 K3 V2 ]9 A1 E6 U+ o9.嚴(yán)格掌握新、舊樹脂的活化、再生條件，及時(shí)再生舊樹脂。
4.離子色譜常見問(wèn)題有哪些
1、電導(dǎo)檢測(cè)器常見故障
電導(dǎo)檢測(cè)器常見故障是檢測(cè)池被污染。
故障原因：污染物主要來(lái)源于沒有經(jīng)過(guò)適當(dāng)前處理的樣品，如濃度過(guò)高、復(fù)雜的樣品基體等。
故障現(xiàn)象：基線噪聲變大，靈敏度降低。
2、分析泵常見故障
分析泵常見故障是泵內(nèi)產(chǎn)生氣泡和漏液
故障現(xiàn)象：基線的噪聲加大，色譜峰形變差（出現(xiàn)亂峰）。
3、抑制器使用中的常見故障與排除
抑制器在離子色譜儀中具有舉足輕重的作用。抑制器工作性能的好壞對(duì)分析結(jié)果有很大的影響。抑制器最常見的故障是漏液，使峰面積減?。`敏度下降）和背景電導(dǎo)升高。
(1)峰面積減小
造成峰面積減小的主要原因有：微膜脫水、抑制器漏液、溶液流路不暢和微膜被玷污。抑制器長(zhǎng)期不用，會(huì)發(fā)生微膜脫水現(xiàn)象，為激活抑制器，可用注射器向陰離子抑制器內(nèi)以淋洗液流路相反的方向注入少許0.2mol/L的硫酸溶液。同時(shí)向再生液進(jìn)口注入少許純凈水，并將抑制器放置半小時(shí)以上。抑制器內(nèi)玷污的金屬離子可以用草酸鈉清洗。
(2)背景電導(dǎo)值高
在化學(xué)抑制型電導(dǎo)檢測(cè)分析過(guò)程中，若背景電導(dǎo)高，說(shuō)明抑制器部分存在一定的問(wèn)題。大多數(shù)是操作不當(dāng)引起的。例如淋洗液或再生液流路堵塞，系統(tǒng)中無(wú)溶液流動(dòng)造成背景電導(dǎo)偏高或使用的電抑制器電流設(shè)置的太小等。膜被污染后交換容量下降亦會(huì)使背景電導(dǎo)升高。而失效的抑制器在使用時(shí)會(huì)出現(xiàn)背景電導(dǎo)持續(xù)升高的現(xiàn)象，此時(shí)應(yīng)更換一支新的抑制器。
(3)漏液
抑制器漏液的主要原因是抑制器內(nèi)的微膜沒有充分水化。
因此，長(zhǎng)時(shí)間未使用的抑制器在使用前應(yīng)讓微膜水溶脹后再使用。另外要保證再生液出口順暢，因此反壓較大時(shí)也會(huì)造成抑制器漏液。另外抑制器保管不當(dāng)造成抑制器內(nèi)的微膜收縮、破裂也會(huì)發(fā)生漏液現(xiàn)象。
